熊果酸对卵巢癌细胞黏附、运动和侵袭的影响

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1、熊果酸对卵巢癌细胞黏附、运动和侵袭的影响：于丽波王晶孙文洲马宝璋【摘要】目的探讨熊果酸(UA)对人高转移卵巢癌细胞HO8910黏附、运动和侵袭的影响。方法以不同浓度的UA处理高转移卵巢癌细胞HO8910，采用MTT法及细胞黏附人工重组基底膜实验检测UA对HO8910细胞的细胞毒作用及黏附能力的影响;Transol/L增加到30μmol/L，与对照组比较，对细胞黏附抑制率增强(P<0.01)，能显著降低HO8910运动能力和侵袭能力(P<0.01)。结论UA能抑制卵巢癌细胞HO8910黏附

2、、运动和侵袭能力。【关键词】熊果酸;卵巢癌;侵袭　　熊果酸(UA)，属于五环三萜类化合物，研究表明具有抗炎、护肝、降血脂等多种生物学活性。近年来研究发现UA具有多种抗肿瘤的作用〔1～3〕，但其是否通过抑制肿瘤侵袭转移起抗肿瘤作用还未见报道，本研究旨在通过体外实验探讨UA对卵巢肿瘤细胞侵袭转移的影响和机制。　　1材料与方法　　1.1材料人卵巢癌细胞株HO8910引自哈尔滨医科大学附属肿瘤医院研究所;UA、二甲基亚砜(DMSO)购自Sigma公司;RPMI1640培养基、四甲基偶氮唑蓝(MTT)、新生牛血清、

3、胰蛋白酶购自杭州四季青生物工程公司;Transega公司;Matrigel购自BectonDickinson公司。　　1.2实验方法　　1.2.1细胞培养细胞在含10%小牛血清、100U/ml青霉素和100μg/ml链霉素的RPMI1640的培养液中，37℃、5%CO2孵箱中，细胞经过消化传代，取对数生长期细胞待用。　　1.2.2增殖抑制实验取对数生长期的HO8910细胞，细胞以1×106/孔接种于96孔培养板中。将培养板放入37℃、5%CO2孵箱中培养。待细胞贴壁后取出培养板，加入不同浓度UA，使其浓度

4、分别为10、20、30、40、50μmol/L，每个浓度设3个平行;同时设置空白对照组。培养板放回孵箱继续培养48h，取出培养板，每孔加入MTT，培养板再放回孵箱孵育4h。吸出上清液，加入200μl二甲基亚砜。用酶标仪测570nm波长处每孔的吸光度(A)值。计算增殖抑制率。增殖抑制率(%)=(对照组A值一处理组A值)/对照组A值×100%。　　1.2.3细胞黏附实验取96孔细胞培养板，每孔加入无血清RPMI1640稀释的Matrigel胶溶液25μl，37℃孵箱过夜，磷酸盐缓冲液(PBS)冲洗2次，室温干燥

5、1h。每孔加入2%牛血清白蛋白(BSA)20μl，置37℃孵箱1h，PBS冲洗2次，室温干燥1h。收集对数生长期的HO8910细胞，悬浮于含0.1%BSARPMI1640培养基中，终浓度为6×108/L。用不同浓度UA预处理细胞24h，使其终浓度分别为10、20、30μmol/L，每孔加入预处理细胞100μl，对照组加入等量的PBS，置孵箱内1h，弃去未黏附的细胞，MTT法测570nm处测A值。每组设3个平行孔，实验重复3次。按下式计算细胞黏附抑制率。细胞黏附抑制率=(1-给药组A值/对照组A值)×100

6、%。　　1.2.4细胞侵袭实验细胞侵袭重建基底膜实验在Transol/L，对照组加入等量的PBS。37℃，5%CO2温箱培养24h。用棉签擦尽膜的内表面未穿过膜的细胞。随机选择5个400倍显微视野，统计视野中侵袭至滤膜下表面的细胞数目，计算平均值。按下式计算药物对肿瘤细胞侵袭的抑制率：抑制率=对照组平均侵袭细胞数-给药组平均侵袭细胞数/对照组平均侵袭细胞数×100%。　　2.2UA对卵巢癌细胞株HO8910黏附能力的影响10，20，30μmol/LUA作用细胞24h时，HO8910黏附能力分别为0.389±

7、0.074，0.371±0.043和0.312±0.011，均显著低于空白对照组(0.695±0.127)(P<0.01)，10，20，30μmol/LUA组表1UA对卵巢癌细胞株HO8910细胞的生长抑制作用(x±s)　　2.3UA对卵巢癌细胞株HO8910侵袭能力和运动能力的影响结果如表2，图1所示，不同浓度的熊果酸在体外作用24h后可以显著抑制HO8910细胞的侵袭和细胞体外趋化运动能力，实验组与对照组比较具有显著性差异(P<0.01)。表2UA对卵巢癌细胞株HO8910侵袭能力和趋

8、化运动能力的影响(x±s)　　3讨论　　卵巢癌是女性三大恶性肿瘤之一，尽管采用了肿瘤细胞减灭术和多种化疗方案，但其5年生存率依然无明显改善。恶性肿瘤的侵袭、转移是引起肿瘤患者治疗失败和死亡的主要原因，肿瘤细胞首先通过膜表面受体黏附于由细胞间质与基底膜组成细胞外基质(ECM)成分纤维黏连蛋白、层黏连蛋白和Ⅳ型胶原蛋白上，然后以蛋白酶降解基底膜和基质，最后定向运动穿越ECM破损处，侵入局部血管、淋巴管，