epo-tat融合蛋白的神经保护作用与对akt、erk通路的影响

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1、学位论文独创性声明本人声明，所呈交的学位论文系在导师指导下本文独立完成的研究成果。文中任何引用他人的成果，均已做出明确标注或得到许可。论文内容未包含法律意义上已属于他人的任何形式的研究成果，也不包含本人已用于其他学位申请的论文或成果。与我一同工作的同志对本研究所做的任何贡献均已在论文中作了明确的况明并表示谢意。本文如违反上述声明，愿意承担以下责任和后果：1、交回学校授予的学位证书；2、学校可在相关媒体上对作者本人的行为进行通报；3、本文按照学校规定的方式，对因不当取得学位给学校造成的名誉损害，进

2、行公开道歉。4、本人负责因论文成果不实产生的法律纠纷。论文作者签名：当堕鱼学位论文版权使用授权书本人完全了解山西医科大学有关保留、使用学位论文的规定，同意学校保留或向国家有关部门或机构送交论文的复印件和电子版，允许论文被查阅和借阅；本人授权山西医科大学可以将本学位论文的全部或部分内容编入有关数据库进行检索，可以采用影印、缩印或其他复制手段保存论文和汇编本学位论文。本人离校后发表或使用学位论文或与该论文直接相关的学术论文或成果时，署名单位仍然为山西医科大学。(保密论文在解密后应遵守此规定)论文作者

3、签名：指导教师签名：日．R期：竺!年—L月』'_日日期：12年—L月．rEt(本声明的版权归山西医科大学所有，未经许可，任何单位及任何个人不得擅自使用)山西医科大学七年制临床医学硕士专业学位论文刖置缺血性脑血管病是引起人类致死和致残的三大疾病之一，在当前发达国家以及我国的疾病死亡率排序上仅次于心血管疾病和肿瘤，位于第三位。溶栓治疗是急性缺血性脑卒中的首选治疗方法，NINDS卒中研究证实在起病3小时内给予静脉内rt．PA溶栓治疗能够改善患者的神经功能，PROACT研究发现对于大脑中动脉的急性闭塞患

4、者在病后6小时内经动脉给予前尿激酶原溶栓治疗也能够改善患者的神经功能I卜7】。但是由于治疗时间窗狭窄，仅少数患者能够接受溶栓治疗，限制了溶栓治疗的普及与推广。因此，有效的神经保护方法，可以延长缺血半暗带的脑组织的存活时间，进而延长溶栓治疗的时间窗。有效的神经保护治疗也可以限制血管再通后发生的再灌注损伤。现代血管内治疗技术的进步为血管再通提供了更多选择，近年来动静脉联合药物溶栓、超声辅助溶栓、急诊支架治疗以及Merci机械取栓器

5、2，8】等的研究进一步提高了缺血性脑卒中急诊期的血管再通率。但血管再

6、通治疗可导致再灌注损伤，影响了该病疗效的进一步提高。脑保护研究已经发展多年，研究日益深入，实验研究筛选了上百种有效的神经保护药物，尽管在动物实验中这些药物具有良好的脑保护效应，但临床上的前期实验效果欠佳[9-12】，对这种现象的一种解释就是缺血性及再灌注性脑损伤是一种多因素的机制，所以仅干预其中一种机制可能无法起到脑保护作用。多干预途径的脑保护措施，如亚低温11孓DJ和缺血预适应是具有可靠的脑保护作用的，这些综合性保护措施的临床前景也更令人期待。促红细胞生成素(Erythropoietin，EP

7、O)主要是由肾脏产生的促红细胞生长因子。近来研究发现，脑内神经元和胶质细胞可合成、表达EPO及其受体。在大鼠脑内，Epo存在于海马、内囊、皮层和中脑等部位【16】。在正常成人脑组织中Epo及其受体仅有微弱的表达，要在颞叶皮层、海马、小脑、杏仁核。EPO表达主要受组织低氧的影响，脑缺氧及脑缺血可提高EPO的表达【17】。EPO对脑缺血神经元损伤的保护作用是多机制的，包括抗谷氨酸兴奋毒性、调节NO的合成、抗氧化作用、抗炎作用、抗神经元凋亡、促进血管生成、促进神经元再生和神经营养作用等。基于以上性质，

8、EPO被认为对神经细胞具有营养和抗凋亡的双重作用。缺血损伤的离体和活体实验证明EPO在缺血损伤中起着重要的保护作用。最近EPO治疗急性缺血性中风的临床实验也证明：EPO不仅可用于中风的早期治疗，而且对超过tPA治疗时间窗的中风患者也有显著的疗效【18】。因此EPO的应用给中风治疗提供了崭新的前景。EPO主要的给药途径为全身性给药。由于中枢神经系统存在血脑屏障，仅有少于1％的药物可以透过血脑屏障，因此只有大剂量多次注射，脑内才能获得临床有效浓度。临床实验表明，EPO治疗的脑卒中的剂量约为50—15

9、0U／kg，但此剂量显著了提高红细胞系及血小板增生119】，提高了血栓形成的危险因素、加重缺血性脑损伤，因此严重限制了中风患者对EPO的应用。EPO．TAT是利用蛋白质转导技术合成的一种具有生物活性的融合蛋白，此蛋白携带山西医科大学七年制I临床医学硕士专业学位论文TAT蛋白转导域，可以高效的跨过血脑屏障，从而降低了其全身性副作用，提高其神经系统损伤的保护作用。本研究的目的是检测EPO．TAT是否具有神经保护作用，并且探索其可能的机制。2山西医科大学七年制临床医学硕士专业学位论文材料及方法一、实验