β蜕皮甾酮抑制神经细胞凋亡作用机制体内外研究

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1、中国医科大学研究生学位论文独创性声明吣Y㈣22㈣96磐㈣58眦2眦本人申明所呈交的学位论文是我本人在导师指导下进行的研究工作及取得的研究成果。据我所知，除了文中特别加以标注和致谢的地方外，论文中不包含其他人已经发表或撰写过的研究成果，也不包含为获得我校或其他教育机构的学位或证书而使用过的材料，与我一同工作的同志对本研究所做的任何贡献均已在论文中作了明确的说明并表示谢意。申请学位论文与资料若有不实之处，本人承担一切相关责任。论文作者签名：∑蕉濉日期：j翌址／沙中国医科大学研究生学位论文版权使用授权书本人完全了解中国医科大学有关保护知识产权的规定，即：研究生在攻读学位期间论文工作的知识产权单位

2、属中国医科大学。本人保证毕业离校后，发表论文或使用论文工作成果时署名单位为中国医科大学，且导师为通讯作者，通讯作者单位亦署名为中国医科大学。学校有权保留并向国家有关部门或机构送交论文的复印件和磁盘，允许论文被查阅和借阅。学校可以公布学位论文的全部或部分内容(保密内容除外)，以采用影印、缩印或其他手段保存论文。论文作者签名：∑望鲨：2堕指导教师签名：迢强‘呈i日期：迎苎厶!f1目录一、摘要中文论著摘要⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯·1英文论著摘要⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯·6二、英文缩略语⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯1

3、2三、论文前言⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯一1。3一刖舌⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯“材料与方法⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯14实验结果⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯17讨论⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯··25结论⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯··26四、本研究创新性的自我评价⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯27五、参考文献⋯⋯⋯⋯⋯

4、⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯28六、附录综述⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯··30在学期间科研成绩⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯38致谢⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯一39个人简介⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯40·中文论著摘要·p一蜕皮甾酮抑制神经细胞凋亡作用机制的体内外研究刖罱阿尔茨海默病(AD)是一种发生于老年期或老年前期的慢性进行性神经退行性疾病，AD的发病机制目前尚未完全阐明，但自由基损伤学说和细胞凋亡学说备受人们的关注，其

5、特征性的病理变化之一是脑内神经元数目明显减少，尤其是基底前脑和海马区受累最严重，神经元减少平均达47％。目前认为，细胞凋亡可能是引起神经元减少的重要原因，与年龄相匹配的非AD老年人相比，AD脑的易损区细胞凋亡明显增加，可见DNA断裂损伤，凋亡小体及染色质凝集等。D一蜕皮甾酮(20一Hydroxyecdysone)是从露水草等提取出的一类植物甾酮，主要用于改善脑缺血症状、改善脑血管痉挛，改善脑功能。对高等动物表现出较强的药理活性，具有改善微循环、抗氧化及细胞保护、降低毛细血管通透性、影响免疫系统及中枢神经系统等等多种功效。现有研究表明p一蜕皮甾酮对缺氧、炎症等多种因素下细胞的分化、增殖、凋亡

6、、分泌具有调节作用。已经有实验报道p．蜕皮甾酮对AD有治疗作用，但其具体机制还不清楚。然而p一蜕皮甾酮是否能通过抑制神经细胞凋亡治疗AD，以及它的作用机制尚未见文献报到。在本实验中我们首先用APP／PS一1转基因AD模型小鼠验证B一蜕皮甾酮抑制神经细胞凋亡及改善小鼠学习记忆能力的作用。然后在PC．12细胞系中构建p一淀粉样多肽(Aft)引起细胞凋亡的模型，研究p一蜕皮甾酮对p-淀粉样多肽(AD)引起细胞凋亡的抑制作用及其机制。材料与方法1、实验动物APP／PS．1转基因小鼠12只，雌雄各半，9月龄(22士2)g，由中国医科大学实验动物中心提供。2、行为学检测(水迷宫)A．定位航行实验B．空

7、间探索实验3、细胞培养PC．12细胞使用DMEM培养基含10％的灭活小牛血清，以及100IU／ml青霉素，和100gg／ml链霉素。4、Real—timePCR(SYBRGreenmethod)细胞采用RNeasyplusMinikit提取总RNA，使用SYBRGreenPCRmastermix进行定量real—timePCR扩增，总体积20p1。使用7900HT实时定量PCR仪。5、Westemblot法检测蛋白表达细