蜕皮甾酮对氧化应激诱导肝糖异生的影响

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1、中图分类号：R89；R36；R39硕士学位论文蜕皮甾酮对氧化应激诱导肝糖异生的影响院（系）、所临床医学院研究生姓名盛培培学科、专业内科学导师姓名陈秋教授二Ο一二年四月目录1蜕皮甾体对氧化应诱导肝糖异生的影响„„„„„„„„11.1中文摘要„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„11.2英文摘要„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„31.3前言„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„61.4材料与方法„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„121.5结果„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„281.6讨

2、论„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„351.7结论„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„411.8参考文献„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„421.9英汉缩略词对照表„„„„„„„„„„„„„„„„„462致谢„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„473SIRT1在2型糖尿病发病机制中的作用（综述）„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„48蜕皮甾酮对氧化应激诱导肝糖异生的影响摘要目的：糖尿病是一种由胰岛素分泌缺乏或胰岛素抵抗导致的以血糖升高为主要表现的慢性疾病，其发病率逐年上

3、升，关于其发病机制及治疗手段的研究也日益深入，2型糖尿病的发病机制研究中，又以胰岛素抵抗的产生机制为主要研究对象，近年来，越来越多研究表明氧化应激在胰岛素抵抗的发生发展中起着至关重要的作用。其具体机制尚不十分明确；肝脏糖异生作为体内糖代谢的重要环节，其两个关键酶PEPCK、G-6-Pase的表达对血糖水平具有决定性意义；蜕皮甾酮在糖尿病及其相关并发症方面的作用如增加葡萄糖消耗，抗氧化应激等也已得到实验证实，故本实验取正常大鼠的肝细胞建立体外大鼠肝细胞氧化应激损伤模型,后予以各浓度蜕皮甾酮(ecdysterone,ECR)

4、进行损伤后再干预，并用吡格列酮（Pioglitazone，PIG）作为阳性药物对照，拟从细胞水平观察氧化应激及糖异生与胰岛素抵抗的关系，通过对细胞内糖异生相关因子的表达水平的观察，了解蜕皮甾体对氧化应激诱导糖异生的作用，间接寻找蜕皮甾酮改善胰岛素抵抗的作用机制。方法：本实验以正常大鼠肝细胞为实验细胞模型，从实验室购得正常BRL-3A大鼠肝细胞株，予以高糖培养基常规培养后，随机分组：(1)正常细胞环境组：继续予以高糖培养基培养，不加任何其他干预因素；(2)氧化应激模型组:用含浓度为100umol/L双氧水的高糖培养基培养4

5、小时；然后再随机分成三组，一组停止培养，提取蛋白并变性后-20℃保存，为单纯双氧水组；一组继续予以蜕皮甾酮-6-7-8干预，予以ECR1×10mmol/L，ECR1×10mmol/L,ECR1×10mmol/L三个浓度的高糖培养液培养24小时；一组予以阳性对照药物吡格列-5酮干预，予以含浓度为1×10mmol/L吡格列酮继续培养24小时。各组培养基中均加入100nM的胰岛素，以模拟正常细胞环境。结果：-5(1)药物对BRL-3A细胞的影响：当蜕皮甾酮浓度超过1×10mol/L浓度时细胞OD值开始出现明显下降，提示此浓度范

6、围蜕皮甾酮可明显-9抑制细胞的生长（p<0.01），当蜕皮甾酮浓度低于1×10mol/L时，细胞OD值较高，提示小于此浓度的蜕皮甾酮对细胞影响过小，蜕皮-6-8甾酮浓度为1×10—1×10mol/L时，细胞OD值在0.7左右，再结合其他实验数据，取此浓度作为实验所用蜕皮甾酮干预浓度；（2）实验各组Akt、p-Akt、FoxO1蛋白表达水平的变化影响：通过各组实验统计学分析后对比发现，实验各组的Akt蛋白表达差异不具有有统计学意义（p<0.01）；与单纯双氧水组相比，后续再予以药物干预各组细胞Akt磷酸化水平增高，p-Ak

7、t蛋白表达有不同程度的增加，差异具有统计学意义(p<0.01)，其下游FoxO1蛋白的表达则出现不同水平的减少。（3）各组细胞FOXO1、PEPCK和G-6-PasemRNA的表达情况：与空白对照组比较，仅用双氧水处理后细胞PEPCK和G-6-PasemRNA表达最高（p<0.01）；相比之下，后续用蜕皮甾酮及吡格列酮干预的细胞PEPCK和G-6-PasemRNA表达有不同程度降低（p<0.05）。结论：(1）高浓度的蜕皮甾酮对BRL-3A大鼠肝细胞有细胞毒性作用；(2)双氧水干预后引起的氧化应激损伤可使细胞内FoxO1

8、蛋白表达增加，使Akt磷酸化减少，同时，糖异生关键酶PEPCK，G-6-Pase这两个基因的表达增加，提示氧化应激可诱导糖异生，增加肝脏葡萄糖的输出。（3）蜕皮甾酮干预后细胞p-Akt蛋白表达水平不同程度升高提示蜕皮甾酮可增加Akt磷酸化水平，同时其下游FoxO1蛋白的表达水平也可受到抑制，PEPCK，G-6-Pas