蜕皮甾酮对3t3-l1胰岛素抵抗模型细胞glut4和pparr蛋白及pparrmrna的影响

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1、目录1蜕皮甾酮对3T3．L1胰岛素抵抗模型细胞GLUT4和PPAR7蛋白及PPAR7mRNA的影响⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯11．1中文摘要⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯11．2英文摘要⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯41．3前言⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯81．4材料与方法⋯⋯⋯⋯000⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯171．5结果⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯321．6讨论⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．．·401．7结论⋯⋯⋯⋯⋯⋯O00⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯461．8

2、参考文献⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯471．9英汉缩略词对照表⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯562致谢⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯090OBD6QO410⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯·一593胰岛素抵抗与胰岛素信号通路的相关关系研究进展(综泸州医学院硕士学位论文蜕皮甾酮对3T3-L1胰岛素抵抗模型细胞GLUT4和PPART蛋白及PPARTmRNA的影响摘要～煳溯目的：经过诱导3T3．L1前脂肪细胞(小鼠胚胎成纤维细胞)使其分化成熟为脂肪细胞，选取生长满足实验条件的细胞，按浓度使用含游离脂肪酸(FFA)液孵育培养，使成为胰岛素抵抗(IR)细胞模型，再进

3、一步使用蜕皮甾酮(ECR)和吡格列酮(pioglitazone)对其增殖分别进行干预并比较对照，继而来探讨ECR对体外细胞实验中对IR模型的影响和作用的强度。观测的目标我们选取两种蛋白：葡萄糖转运子4(GLUT4)和过氧化物酶体增殖物激活受体丫(PPAR7)，一个基因：转录因子PPAR7Im矾A。通过分析比较蜕皮甾酮对以上三种因子表达的影响，来探讨蜕皮甾酮影响上述因子表达的部分机制。方法：用DMEM(hi曲glucose)培养液常规培养3T3一L1前脂肪细胞，每隔48小时按要求换液一次，当细胞融合48小时后，用含有IBMX(3-Isobutyl一1

4、．methylxanthine，卜甲基一3异丁基黄嘌呤)+DEX(dexterity，地塞米松)+INSULIN的DMEM(highglucose)培养液培养2天，然后换101xg／mlINSULIN培养液再培养6-8天；最后以完全培养液继续培养，2天换液一次，共诱导分化12—14天，至完全分化成3T3．L1脂肪细胞：然后更换为含有胎牛血清(BSA，29eL)的高糖DMEM(highglucose)培养液培养3T3．L1脂肪细胞12h后，更换成为己添加有PA(O．5mmol／L)、FAFBSA(109／L)的DMEM培养液过夜(24h)，IR细胞模

5、型成功建模。加不同浓度ECR及pioglitazone(1x10‘5mol／L)孵育，24小时。提取相关物质，适当处泸州医学院硕士学位论文理后使用Westernblot法检测二种蛋白(GLUT4，PPART)的表达水平。用RT-PCR检测一个基因(PPAR7mRNA)的表达程度。分组：第(1)组：3T3．L1脂肪细胞，定名称为空白对照组；第(2)组：游离脂肪酸(FFA)诱导的承模型细胞，为模型组；第(3、4、5)组：为ECR1x10。7mol／L低浓度组、ECRlx10击mol／L中浓度组、ECRlxl0’5mol／L高浓度组，分别称为ECR低、中

6、、高浓度组；第(6)组：吡格列酮浓度为1x10一mol／L，定名为吡格列酮组。结果：细胞培养、造模及干预过程中细胞生长良好，对浓度在1×lO‘7～1X106mol／L的ECR，实验细胞表现出良好的适应性；与第(2)组相比较，在lXl0。7～1x10。5mol／L浓度范围的ECR及lxlO巧mol／Lpioglitazone，可使胰岛素抵抗模型细胞相关蛋白(GLUT4，PPARl,)及基因(转录因子PPART)的表达量增加。结论：(1)浓度在1xlO刁～1x105mol／L的ECR，均可增加IR模型细胞的葡萄糖转运子4(GLUT4)蛋白的表达；浓度在

7、lx10‘5mol／L的pioglitazone增加瓜模型细胞的GLUT4蛋白的表达；浓度在lxl0≤mol／L的ECR及pioglitazone增加承模型细胞的GLUT4蛋白的表达作用相当(P=O．234)。(2)浓度在lxl0‘7～lxlO巧mol／L的ECR，均可增加IR模型细胞的PPAR7蛋白的表达；浓度在lxl0‘5mol／L的pioglitazone增加IR模型细胞的PPAR7蛋白的表达；浓度在1x10‘5mol／L的ECR及pioglitazone增加IR模型细胞PPAR7蛋白的表达作用差异有统计学意义(P=O．009)。(3)浓度在

8、lxlO。7～1x10巧mol／L的ECR，均可增加IR模型细胞PPAR7mRNA的表达；浓度为1x10。5mol／L的p