mirna-21改善3t3-l1脂肪细胞模型的胰岛素抵抗及机制研究

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1、中图分类号UDCR5861O硕士学位论文学校代码!Q三33密级公珏m氓NA．2l改善3T3．L1脂肪细胞模型的胰岛素抵抗及机制研究TheinnuenceandmechanismofmiRNA一21aUeViating3T3一L1adipocytesmodelinSulinresistance作者姓名：钟丽颖学科专业：临床医学研究方向：老年医学学院(系、所)：湘雅医院指导教师：刘慧霞教授论文答辩日期即f弓!里莎答辩委员会主席中南大学二O一三年五月’胍，’，原创性声明本人声明，所呈交的学位论文是本人在导师指导下进行的研究工作及取得的研究成

2、果。尽我所知，除了论文中特别加以标注和致谢的地方外，论文中不包含其他人已经发表或撰写过的研究成果，也不包含为获得中南大学或其他单位的学位或证书而使用过的材料。与我共同工作的同志对本研究所作的贡献均已在论文中作了明确的说明。作者签名：—牲日期：旦年』月鲨日学位论文版权使用授权书本人了解中南大学有关保留、使用学位论文的规定，即：学校有权保留学位论文并根据国家或湖南省有关部门规定送交学位论文，允许学位论文被查阅和借阅；学校可以公布学位论文的全部或部分内容，可以采用复印、缩印或其它手段保存学位论文。同时授权中国科学技术信息研究所将本学位论文收

3、录到《中国学位论文全文数据库》，并通过网络向社会公众提供信息服务。作者签名：腔#塑导师签名—皇整日期：卫年』月鲨日miRNA．21改善3T3．L1脂肪细胞模型的胰岛素抵抗及机制研究摘要目的：通过高糖高胰岛素培养诱导3T3．L1脂肪细胞株构建胰岛素抵抗(insulinresistance，R)模型，观察IR脂肪细胞miR-21表达量的变化及脂肪细胞miR-21表达增加对IR的改善作用，并初步探讨其改善脂肪细胞胰岛素敏感性的部分机制。方法：(1)通过传统的鸡尾酒方法诱导3T3．L1前脂肪细胞分化成熟脂肪细胞；(2)将成熟3T3．L1脂肪细

4、胞分为正常糖低INS(NGU)组、正常糖高INS(NG】m)组、高糖低INS(HGLI)组、高糖高INS(HGⅢ)组，应用氘标记的2．脱氧葡萄糖(2．3H．DG，2．DG)摄取试验检测脂肪细胞INS敏感性，通过高糖高胰岛素处理建立3T3．L1成熟脂肪细胞IR模型；(3)将IR脂肪细胞分为3组：IR组、转染含pmiR-21质粒转染组(pmiR-21)、转染空质粒转染组(pNC)，并设立对照组(正常脂肪细胞)，实时荧光定量RT．PCR技术检测各组脂肪细胞miR．21表达水平差异；(4)应用2．DG摄取试验检测以上各组脂肪细胞的INS敏感性

5、；(5)Westemblot技术检测各组脂肪细胞PⅡN蛋白、舭蛋白以及p．舢f耐73蛋白水平的差异。TT结果：(1)3T3．L1前脂肪细胞分化成熟，诱导第10天油红O染色可见呈圆形或椭圆形，细胞浆内大量红色脂滴聚集的分化成熟的3T3．L1脂肪细胞；(2)NGm组与NI乩I组相比3T3．L1细胞INS刺激葡萄糖摄取无显著差异(尸>O．05)。HGLI组的3T3．L1细胞INS刺激葡萄糖摄取与NGLI组相比减少(尸

6、比明显减少(PO．05)，pmiR-21组与IR组比较，miR-21表达量增加(尸O．05)；(4)IR组与对照组比较，INS刺激葡萄糖摄取率减少(PO．05)，与取组比较摄取增加(尸

7、比较INS刺激葡萄糖摄取率减少(户O．05)，与pmiR21组相比较减少(P0．05)，与R组比较PⅡN表达减少(尸

8、少(PO．05)。各组脂肪细胞的舭表达无显著差异(户>O．05)。结论：(1)高糖高INS诱导3T3．L1脂肪细胞产生IR，miR_21表达减少，PⅡN