胰岛素抵抗3T3-L1脂肪细胞AMPK、PPARγ的表达及意义.pdf

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1、2014年第7期胰岛素抵抗3T3一L1脂肪细胞AMPK、PPAR~的表达及意义冰吴乃君刘颖金秀平陈晶马绍杰盛佳曦魏剑芬(。河北联合大学附属医院内分泌科河北唐山063000)(河北联合大学河北唐山063000)【摘要】目的观察胰岛素抵抗的的水平变化，探讨胰岛素抵抗脂肪细胞的分子机制。方法体外培养前脂肪细胞，并诱导其分化成熟，地塞米松诱导成熟脂肪细胞形成胰岛素抵抗，利用RT—PCR技术检测和葡萄糖转运子4表达变化。结果地塞米松作用于3T3一LI脂肪细胞葡萄糖消耗量明显降低，地塞米松诱导的胰岛素抵抗状态下AMPK、PPAR和GLUT4mRNA表达水平显著下调。结论地塞米松降低313一Ll脂肪

2、细胞葡萄糖消耗量产生胰岛素抵抗，提示其表达水平下降可能是3T3一L1脂肪细胞胰岛素抵抗原因之一。【关键词l地塞米松；3T3一Ll脂肪细胞；胰岛素抵抗；腺苷酸活化蛋白激酶；过氧化物酶增殖受体；葡萄糖转运子4【Akstraet】ObiectiveToobservethechangesofinsulinresistancelevel，toinvestigatethemolecularmechanismofinsulinresistanceadipoytes．Culturedpreadipocytesinvitro．andin—duceitsdiferentiationinducedbydex

3、amethasoneinmatureadipocytes．insulinresistance，change4expressionwasmeasuredbyRT—PCRtechniqueandglucosetransporter．Resultsdexametha．saneefectsonglucoseconsumptionof3T3一L1cellsdecreasedsignificandy，stateAMPK，PPARandGLUT4mRNAexpressionwassignificantlylowerinthedexamethasoneinducedinsulinresistance．

4、Conclusiondexamethasonereducedglucoseconsumptionof313一L1fatycellsproduceinsulinresistance，suggestingthatthegeneexpressionleveldecreasedmaybeonereasonofin—sulinresistancein313一L1adipocytes【keywordsldexamethasone；3t3一L1fatcells；Insulinresistance；Ampactivatedproteinkinase；Receptorgammaperoxidasepro

5、liferation；[heSueo~tmns~【中图分类号】R587．1【文献标识码】B【文章编号】1004—4949(2014)07—0027—01綦金资助：河北省科技厅(-甲双胍对同型半胱氨酸及脂源性激素的影响研究》资助，课题编号122777104；唐山市科技局(-甲双胍对同型半胱氨酸的影响研究》资助，课题编号13130266Z。肥胖、胰岛素抵抗是2型糖尿病发病的病生理基础。肥胖是外部表象，内在根源在GLUT4引物于脂肪细胞体积、数量的变化及糖、脂代谢紊乱。本研究选取313一LI前脂肪细胞为实上游：5’一_rCTCGGTGCTCn

6、AGTAG—3’验对象，采用地塞米松诱导建立胰岛

7、素抵抗的脂肪细胞模型，观察地塞米松对3T3一L1下游：5’-CCAATCTCAAAGAAGGCCACAAA-3’脂肪细胞的糖代谢影响，从分子水平探讨313一L1脂肪细胞胰岛素抵抗的分子机制。GAPDH弓I物：l材料与方法上游：5’-GGTGAAGGTCGGTGTGAACG-3’1．1实验材料下游：5’-GCTCCTGGAAGATGGTGATGG-3’3T3一L1前脂肪细胞株由天津血液病研究所惠赠。二甲基亚枫、地塞米松、IBMX、1．3统计学方法油红O均购自美国Sigma公司；胰岛素购自丹麦NovoNordisk公司、DMEM培养基购自所有数据采用SPSSI3．0软件包进行统计分析，计量

8、资料以均数士标准差(X4-s)赛默飞世尔生物化学制品有限公司；葡萄糖测定试剂盒一氧化酶法购自盛科博源公司；表示，组间差异用t检验，P(0．05有统计学意义。荧光定量PCR试剂盒购自上海生工生物工程技术服务有限公司。2结果1．2实验方法2．13T3一L1脂肪细胞形态的观察：1．2．1体外扩增、培养未诱导分化的33"3一LI前脂肪细胞呈为梭形成纤维细胞，胞浆内没有脂滴。胞核清大鼠前脂肪细胞(3T3一LI)，培养基采用含l5％胎牛血清的DMEM培养液