二甲双弧对AMPK、PPARγ的影响与胰岛素抵抗的研究

《二甲双弧对AMPK、PPARγ的影响与胰岛素抵抗的研究》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在学术论文-天天文库。

1、分类号：R587．1密级：内部2年学位类别：科学学位口专业学位团学校代码：1062学号：20084010学科门类：医学又坪篑科鼻垮博士学位论文DOCTORALDISSERTATION论文题目：二甲双胍对AMPK、P脚的影响与胰岛素抵抗的研究TITLETheeffectofmefforminonAMPK，PPAR?andinsulinresistance一级学科：临床医学二级学科：内科学内分泌与代谢病论文作者：吴乃君指导教师：冯凭天津医科大学研究生院二0一一年五月学位论文原创性声明本人郑重声明：所呈交的论文是我个人在导师指导下独立进行研究工作取得的研究成

2、果。除了文中特别加以标注引用的内容和致谢的地方外，论文中不包含任何其他个人或集体已经发表或撰写过的研究成果，与我一同工作的同志对本研究所做的任何贡献均已在论文中作了明确的说明并表示了谢意。学位论文作者签名：凸幺日期：)州年6月6日学位论文版权使用授权书本学位论文作者完全了解天津医科大学有关保留、使用学位论文的规定，即：学校有权将学位论文的全部或部分内容编入有关数据库进行检索，并采用影印、缩印或扫描等复制手段保存、汇编以供查阅和借阅。同意学校向国家有关部门或机构送交论文，并编入有关数据库。本论文属于保密圈，在．兰．年解密后适用本授权书。不保密口。学位论文

3、作者签名：厶!生日期：I’，J导师签名同期：川年6月‘日加，7年6月，同天津医科大学博士学位论文中又于两要目的：1、通过观察2型糖尿病模型大鼠脂肪组织中腺苷酸活化蛋白激酶(AMPK)、过氧化物酶体增殖物激活受体Y(PPAR?)的表达，及二甲双胍对其影响，探讨二甲双胍改善糖、脂代谢、胰岛素敏感性机制，为二甲双胍的临床应用提供更多的理论依据。2、通过体外建立3T3．L1细胞胰岛素抵抗模型，应用二甲双胍进行干预治疗，观察胰岛素抵抗状态下AMPK、PPAR丫、葡萄糖转运子4(GLUT4)的表达情况，并观察二甲双胍对AMPK、PPAR?的作用，分析其对．胰岛素抵

4、抗的干预作用是否与上调AMPK、PPAR?有关。方法：1、正常wistar雄性大鼠30只普通饲料适应性喂养1周后，随机分为正常组(NC组)和糖尿病组(DM组)。NC组给予普通饲料至实验结束。DM组给予高脂饮食联合腹腔注射d,N量链脲佐菌素(Streptozotocin，STZ)40mg／kg的方法制备2型糖尿病模型，造模成功后随机分为模型组(DM．C)和治疗组(DM．T)。DM．T组给予盐酸二甲双胍(Metformin，met)灌胃治疗4周。测定大鼠治疗前后的体重，实验末测定各组大鼠肾周及睾周脂肪重量，计算大鼠脂体比；检测各组大鼠空腹血糖(fastin

5、gplasmaglucose，FPG)、胰岛素(insulin，INS)、血清总胆固醇(totalcholesterol，TC)、甘油三酯(totalcholesterol，TG)、高密度脂蛋白(highdensitylipoprotein，HDL。C)、低密度脂蛋白的水乎(Lowdensitylipoprotein，LDL．C)，并计算胰岛素敏感指数(Fastingsensitiveindex，ISI)；实时荧光定量(realtime．polymerasechainreaction，RT-PCR)检测各组大鼠脂肪组织AMPK及PPARTmRNA的水平

6、。2、以美国国立细胞库(AmericanTypeCultureCollection，ATCC)3T3．L1细胞作为实验对象进行培养和诱导分化。参考AnilKumarKL分化前脂肪细胞的方法，对细胞进行分化：将3T3。L1前脂肪细胞置于含15％小牛血清的DMEM高糖培养基中，37℃，5％C02饱和湿度下培养。细胞状态良好时接种于培养皿，加入含0．5mmol／L3．异丁基．1．甲基黄嘌呤(IBMX)、lOug／mL胰岛素、lumol／I地塞米松15％小牛血清的DMEM高糖培养基培养48h，之后换以含1ug／mL胰岛素的培养基再培养48h，随后以15％小牛血

7、清的DMEM高糖培养基继续培养，2d换培养液1次，诱导分化8～12d的3T3．L1细胞，80％～90％以上呈脂肪细胞表型可用于试验。运用油红O染色证明前脂肪细胞诱导成为成熟脂肪细胞：移去诱导分化结束细胞的培养基，用PBS清洗，用10％多聚甲醛固定30min，加入油红O溶液染色30min，用异丙醇脱色，天津医科大学博士学位论文然后用苏木精复染细胞核，倒置显微下观察、照相。3T3．L1脂肪细胞胰岛素抵抗细胞模型的建立及药物处理。对分化好的细胞分组进行处理：加lumol／L地塞米松诱导胰岛素抵抗，每2d换1次液，取上清液，以培养基中的葡萄糖的消耗量差值反映胰

8、岛素抵抗的程度。葡萄糖含量用葡萄糖检测试剂盒测定。在胰岛素抵抗模型成立以后，设空白对照组、地塞