葛根调节脂肪细胞糖脂代谢改善胰岛素抵抗的研究お

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1、葛根调节脂肪细胞糖脂代谢改善胰岛素抵抗的研宄朽［摘要］该实验通过检测葛根对胰岛素抵抗(IR)3T3L1脂肪细胞葡萄糖消耗，甘油三脂(TG)含量及PPARy,ADPN,GLUT4,LPL,FABP4,FASn表达量的影响来探讨葛根调节糖脂代谢改善脂肪IR的作用机制。先采用3T3L1前脂细胞诱导分化的成熟脂肪细胞，地塞米松诱导建立IR模型，将脂肪细胞分为正常组，IR模型组，罗格列酮阳性组，低、中、高剂量葛根含药血清组，以葡萄糖氧化酶过氧化物酶(glucoseoxidaseperoxidase,GODPOD)法检测细胞培养液葡萄糖含量和甘油磷酸氧化酶(glycerolphosphate

2、oxidase,GPOPOD)法测定胞内TG含量，荧光定量qPCR检测PPAR丫，ADPN,GLUT4,LPL,FABP4(aP2)，FASn基因mRNA水平。结果显示1umol?L-l地塞米松作用3T3L1脂肪细胞96h，与正常组比较，模型组葡萄糖消耗量降低(P［关键词］葛根含药血清；胰岛素抵抗；3T3L1脂肪细胞；糖脂代谢葛根为豆科植物野葛Puerarialobata(Willd)Ohwi的干燥根，始载于《神农本草经》，具有解肌退热、透发麻疹、生津止渴、升阳止泻等功效。统计表明在改善胰岛素抵抗(insulinresistance，IR)治疗2型糖尿病(type2ofdiabe

3、tesmellitus，T2DM)的临床用药中，葛根使用率位于第5位［1］。葛根具备清热燥湿凉血功效，可增强胰岛素敏感性。动物实验显示葛根改善ob/ob小鼠糖耐量和脂质代谢［2］。临床研究显示，葛根煎剂联合非诺贝特治疗高脂蛋白血症，能显著降低总胆固醇和甘油三酷(triglycerides，TG)含量，升高高密度脂蛋白水平，在改善高脂血症病人脂质水平上优于单用非诺贝特治疗［3］。除与西药联合治疗外，与葛根适当配伍的许多中药复方显示良好降糖效果，如葛根芩连汤复方在随机双盲临床实验降低空腹血糖和糖化血红蛋白，显示稳定降糖药效［45］。本课题组在均匀设计葛根芩连汤配伍动物实验中发现重用葛

4、根配比能产生更优的降糖降脂药效。葛根的主要药效成分为异黄酮类化合物，包含葛根素、大豆苷元、染料木黄酮等，其中葛根素为葛根特有药效成分，研宄己经证明，葛根素具有抗高胆固醇、抗炎、降血糖、神经保护等多种功效，临床实验显示葛根素可降低空腹血糖，促进3细胞分泌胰岛素［6］;动物实验显示其通过降糖，影响细胞信号通路，增加大鼠骨骼肌细胞膜葡萄糖转运蛋白4(glucosetransportertype4，GLUT4)含量，改善IR［7］。深入研宄葛根的调节糖脂代谢改善IR的机制可为葛根配伍的降糖降脂中药复方提供科学依据和理论基础。血清药理学方法是公认中药复方体外细胞研宄的可行性方法，本实验运用

5、血清药理学研宄方法，研究葛根含药血清(GeGencontainingserum，GGCS)干预IR3T3L1脂肪细胞的降糖降脂药效，并在药效基础上检测过氧化物酶体增殖物激活受体丫(peroxisomeproliferatorsactivatedreceptorgamma，PPAR丫)，月旨耳关素(adiponectin，ADPN)，GLUT4,脂肪蛋白酶(lipoproteinlipase，LPL)，脂转运结合蛋白4(fattyacidbindingprotein4,FABP4)和脂肪酸合成蛋白(fattyacidsynthase,FASn)表达水平，探讨葛根含药血清调节糖脂代谢

6、改善3T3L1脂肪细胞IR的作用机制。1材料1.1动物SPF级雄性SD大鼠，购于北京维通利华实验动物技术有限公司，合格证号SCXK(京)201.20001o1.2细胞株3T3L1小鼠前脂肪细胞株，购于美国ATCC,批号62.99684.7。1.3药物葛根(野葛)购自江中饮片厂，批号1.5092.9,葛根素质量分数为5.5%，符合201.5年版《中国药典》标准。1.4试剂葛根素（批号1.204），大豆苷元（批号1.502.200101）均购自四川省克奇生物科技有限公司；DMEM高糖培养基（Hyclone公司，批号NAE1.3.96）;胎牛血清（浙江天杭生物科技有限公司，批号1.50

7、2.1.5）;新生牛血清（Lifetechnologies公司，批号1.5.1.792.3）；3异丁基1甲基黄嘌呤（3isobutyl1methylxanthine,IBMX,批号1.5.879），地塞米松（批号82.2A05.2.1），胰岛素（批号Y0001.71.7），油红O干粉（ft匕号5.2.2A05.2），罗格列酮（批号R2.408）购自Sigma公司；葡萄糖测定试剂盒（南京建成生物有限公司，批号3.61.500）;甘油三脂测定试剂盒（南京建成生物有限公司，批号A1.1