水貂犬瘟热病毒和抗体检测方法的研究

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1、浆m农学院硕士学位论文摘要水貂犬瘟热病毒与抗体检测方法的研究摘要1通过对河北、山东等地疑似犬瘟热的水貂临床症状和病变进行研究，探讨水貂犬瘟热的临床症状和病变新特点，并进行流行病学调查。研究发现近几年患病水貂出现临床症状病变新的变化，足垫的角质化、皮肤病变现象逐渐减少，后肢瘫痪症状增多。病变与其他疫病症状相类似，缺乏特征性病变。发摘急，死亡率高。一年四季都有发生。2取一发病水貂的肝、脾、脑等组织，常规处理后接种MDcK细胞分离病毒，采用RT_PcR检测病毒。结果显示，应用MDcK细胞分离病毒，传3代后出现明显细胞病变。利用特异性引物，对病毒分离的细胞培养物

2、和疫苗株分别提取总RNA进行RT-PcR扩增，得到长度为294bp的特异性片段，证明了cDV的感染。3本试验筛选出PBsT为样品稀释液，建立胶体金试剂盒。对各项指标进行检测，结果表明：敏感性试验中，阳性病料经倍比稀释处理，经试纸条检测最高稀释倍数为23；阻断试验中，貂抗cDv高免血清能特异地阻断阳性反应；交叉试验显示犬细小病毒、犬传染性肝爽、犬冠状病毒均为阴性；不同批次的试纸条各检测5份阳性病料，均呈现阳性反应，表明重复性高；将测试条低温干燥密封保存，每隔一周检测同一份阳性样品，在半年内其检测结果不变；应用试验结果表明肺和脑为检测首选的组织样品；临床症状

3、及病理变化诊断、R1二PcR和胶体金快速诊断三种抗原检测方法的比较表明胶体金快速诊断适用于快速临诊诊断。4本试验提纯水貂免疫球蛋白，制备HRP．兔抗水貂免疫球蛋白抗体，为问接ELISA提供二抗，琼扩效价为1：16；同时利用本室已构建的pET-32a．F转化宿主菌BL2l，对重组F蛋白其进行提纯，制备间接ELIsA所需的抗原，为下一步建立水貂抗cDv抗体间接ELIsA奠定基础。关键词：犬瘟热病毒；临床症状与病变；流行病学；病毒分离；RT-PcR胶体金诊断；兔抗貂IgG；重组F蛋白莱阳农学院坝二L学位论文英文摘要StudyontheDetectingMeth

4、odsfbrCanineDistemperVirusandIt’sAntibodvintheMinkAbstractStudjedontheclinicaIsymptomandpathoIogicaIchangesofminks，clinicaIsuspectedofcaninedistempeLf而InShandongandHebejProvince．DjscussedIhenewcharactersofcljnica】sympIomandpathoIogicaIchanges，investigatedepidemiologyofcaninediste

5、mper，showedthatreducedeVidenceoffeetkeraCiniza“onandskindamage，increaSedsymptomofIjmbparalysisPathol。gicaIchangesweresimi】arwithotherminkdiseases，lackingofcharacteristic．Minkcanined{stempercanbreakoutina】lseasons．TissuesofliveLspleenandbrainfromaminkcljnjcalIysuspectedofcaninedis

6、temperwereusedforisoIatingvirusonMDCKcellswecollectedViruswhenceIIswasdjscoVeredCPEobviouslyafter3successjvepassages．ThenucIeicacidfhgmentofapproximately294bpin1engIhwasampli而edbyR『r_PCR，usingextractedtotalRNAfromis01ationstrainandVaccineslrainofCDVastemplateJespectively，theresu】

7、tjndicatedpositiVeofCDv．ChosePBSTasdilutions01ulionandestablished901d—labeledone—steptestkit．DeCectionoff01】owingIa唱ets，resulIsindicatedthat：CDVpositiveminktissueswered“utedbyPBSTtotesIthesensitiVityofscrip，jtcouldbedjjutedto8IimesmostlyMjxedpositjvesamplew-thmInkann-CDVserum，onI

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