水貂阿留申病毒、肠炎病毒与犬瘟热病毒多重pcr检测方法的建立与应用

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1、水貂阿留申病毒、肠炎病毒与犬瘟热病毒多重PCR检测方法的建立与应用马芹王元智闰文卓赵丽丽陈洪岩陆涛峰物与比较医学重点实验室目的水貂阿留中病、病毒性肠炎与犬瘟热并称影响水貂健康的三大疫病，拟建立一种可同时检测三种病毒的多重PCR检测方法。方法针对三种病毒基因保守区分别设计了3对特异性引物，对貂阿留申病毒（ADV）和水貂肠炎病毒（MEV）的DNA模板和犬瘟热病毒（CDV）的RNA模板进行丫多重PCR扩增和扩增条件优化。结果PCR可同时扩增出601bp（ADV）、205bp（MEV）和451bp（CDV）的特异性目的条带，敏感性试验表明最低核酸检出量为ADV每微升2.67X10

2、4拷贝、1EV每微升3.02X101拷贝和CDV每微升1.72X105拷贝。临床样品检测结果表明多重PCR和单一PCR检测结果-致。结论建立的多重PCR检测方法可快速地检测ADV、MEV和CDV单一或混合感染的临床样品。关键词：多重PCR;水貂阿留中病毒;水貂肠炎病毐;犬瘟热病毒;基金：国家支撑计划项目（2015BA107B02）EstablishmentandapplicationofamultiplexPCRassayfordetectionofAleutiandiseaseparvovirus,enteritisparvovirusandcaninedistemp

3、ervirusintheminkMAQinWANGYuan-zhiYANWen-zhuoZHAOLi-liCHENHong-yanLUTao-fengHarbinVeterinaryResearchInstitute，ChineseAcademyofAgriculturalSciences，HeilongjiangProvincialKeyLaboratoryofLaboratoryAnimalandComprativeMedicine;Abstract：ObjectiveAleutiandisease,minkenteritisandcaninedistemperare

4、thethreemajordiseasesaffectinghealthofmink.ThisstudyintendstoestablishamultiplexPCRassayforsimultaneouslydetectingofthesethreeviruses.MethodsAccordingtotheconservativesequencesreportedinGenBank,threepairsofspecificprimersweredesignedtoamplifytheDNAtemplatesofAleutianminkdiseaseparvovirus(

5、ADV)，minkenteritisparvovirus(MEV)，andRNAtemplatesofcaninedistempervirus(CDV),andoptimizedtheamplifyingconditions.ResultsThespecificobjectivestripsof601bp(ADV)，205bp(MEV)and451bp(CDV)wereamplifiedsimultaneously.Thesensitivitytestshowedthatthelowestnucleicaciddetectionlimitswere2.67X101copi

6、esperpLforADV,3.02X101copiesperPLforMEV,and1.72X10)copiesperPLforCDV.TheresultsoftestoftheclinicalsamplesshowedthatthemultiplePCRandsinglePCRassaywereconsistent.ConclusionsTheestablishedmultiplexPCRassayinthisstudycanbeusedtorapidlydetecttheclinicalsamplesofADV,MEVandCDVsingleormixedinfec

7、tions.Keyword：MultiplexPCR;Aleutianminkdiseaseparvovirus;Minkenteritisparvovirus;Caninedistempervirus;貂作为重要的经济动物，不仅仅具有经济价值U1，同时貂还是流感病毒、SARS、新城疫病毒、貂圆环病毒、阿留申病毒以及肠炎病毒的宿主，其中雪貂对流感病毒十分易感，感染后表现出与人相似的症状，还能产生免疫反应，因此雪貂可作为研究流感病毒最佳的实验动物模型。貂的实验动物化养殖必须保证背景淸晰,并对其携带的病原体进行控制，所以需要建立一