检测犬瘟热病毒的单克隆抗体胶体金试纸条的制备.pdf

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1、中国动物传染病学报2011，19(2)：26—30ChineseJoumalofAnimaIInfie：ctiousDiseases·研究论文·检测犬瘟热病毒的单克隆抗体胶体金试纸条的制备房超，张泉，易海华，吴萍兰，徐波，吴亚力(1．徐州出入境检验检疫局，徐州221006：2．扬州大学兽医学院，扬州225009)摘要：将从水貂中分离的犬瘟热病毒(Caninedistempervirus，CDV)HB株经培养和纯化后免疫小鼠，制备分泌抗CDV—HB的杂交瘤细胞株，分别命名为2El和7F3，ELISA测定腹水效价均大于l0。亚类鉴定结果表明单抗2El的分子亚类为IgM，7F3的分子亚类

2、为lgG1，间接免疫荧光试验表明，这两株单抗均可以与CDV-HB特异性结合。采用柠檬酸三钠还原法制备胶体金颗粒并标记2E1单克隆抗体，获得检测貂犬瘟热病毒抗原的胶体金免疫层析试纸，且鉴定证明制备的检测CDV的胶体金试纸条具有良好的的特异性。关键词：犬瘟热病毒；单抗；胶体金试纸条中图分类号：$858．292．265．96文献标志码：A文章编号：1674—6422(2011)02—0026—05DEVELoPMENToFCoLLoIDALGoLDIMMUNoCHRoMAToGRAPHICTESTSTRIPBYMoNoCLoNALANTIBoDYAGAINSTCDVFANGChao’，Z

3、HANGQuan，YIHai—hua，WUPing—lan，XUBo，WUYa—lifiXuzhouEntry-一ExitInspectionandQuarantineBureau．JiangS~'uProvince，Xuzhou221006．China；2．YangZhouUniversiO；CollegeoJVeterinaryMedicine．Yangzhou225009．Chinn)Abstract：Thecaninedistempervirus(CDV-HB)isolatedfromminkwasculturedandpurified．Thesplenocytesfrom

4、miceimmunizedwithpurifiedCDV-HBwerefusedwithSP2／0myelomacells．PosflivehybridomawasscreenedbyindirectELISA．andtwomonoclonalantibodiesagainstCDV-HBweregeneratedanddesignatedas2Eland7F3．TheELISAtitersofthetwOmltibodiesinascitesweremorethan10．Thesubtypeidentificationoftheantibodiesdemonstratedthat

5、the2E1belongedtoIgM．andthe7F3waslgG1ThespecificinteractionbetweenCDV-HBvirusandmonoclonal【antibodieswascertifiedbyindirectIFATheMAbof2Elwaspurifiedand1abeledwithgoldparticles，whichwaspreFaredbysodiumcitratemethod，todevelopacolloidMgoldimmuno—chrolnatOgraphicteststripforCDVdetection，andtheresul

6、tsindicatedthatthestriphadthegoodspecificityforCDVdetection．Keywords：Caninedistempervirus；monoclonalantibody；colloidalgoldimmunochromatographicteststrip犬瘟热(caninedistemper，CD)是由传染性犬的不足，导致动物感染CDV的诊断延误，错过适瘟热病毒(Caninedistempervirus，CDV)引起的急宜的控制时机，会给毛皮经济动物产业带来巨大损性、高度接触性传染病，目前已成为危害我乃至失，严重阻碍该产业的顺利发展

7、。因此，对水貂犬全世界养犬业、皮毛动物养殖业和野生动物保护业瘟热进行准确、快速的检验对水貂养殖业的健康发最严重的疫病之一随着经济动物倒养业的集约展非常重要。化、规模化，经济动物疫病尤其是水貂犬瘟热等传CDV的实验室诊断具有怏速、准确和特异性染病会形成暴发流行，同时，由于缺乏有效的现场强的优点，可以在疾病早期确诊，提高疾病的治愈检测手段以及养殖单位对经济动物感染CDV认识率，但目前常用的RT—PCR方法对专业技术要求高，收稿日期：2()IO-08-,)5基金项目：江苏检