鹅源副黏病毒病单克隆抗体的制备及胶体金快速诊断试纸条的研制

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1、鹅副黏病毒单克隆抗体的制备及胶体金快速诊断试纸条的研究摘要木实验建立了检测鹅副黏病毒的快速夹心胶体金免疫层析测试试纸条(ICS)。第一部分，制各鹅副黏病毒的单克隆抗体。采用PEG沉淀法结合SephdexG200层析柱法提纯强毒JG04株GPMv，蛋白含量为1283m∥mL，HA效价为2”10。提纯的GPMv用于免疫小鼠和ELISA包埋；采用PEGl500进行融合，融合率为465％：采用间接ELISA试验和HI试验双向检测杂交瘤细胞分泌的抗体，阳性率为784％；采用有限稀释法进行三次克隆，获得两株

2、稳定分泌抗JG04株鹅副黏病毒抗体的杂交瘤细胞株，命名为3A5、2C6。其中3A5腹水的ELIsA效价为l：51200，没有HI效价；2c6腹水的EuSA效价为1：6400，HI效价为27。第二部分，制备快速夹心胶体金免疫层析检测试纸条。采用柠檬酸钠还原法制备胶体金：将提纯的鸡IgG(抗JG04株GPMv)喷涂在NC膜上，检测线(T)；将金标3A5作为检测试剂，喷涂在玻璃纤维上二。在加样处沾取含有GPMV的尿囊液样品，GPMv与金标3A5结合形成混合液，由于层析原理，混合液向上移动，在检测线(T

3、)上混和液中与金标颗粒结合的GPMV与鸡IgG结合，由于大量GPMV沉积在检测线上，出现红线；而如果尿囊液中不含有GPMv，检测线上不出现红线。该试纸条不与越V、EDSV、IBDV、mV、GPv、CELO的尿囊液和MV、CDV发生交叉反应，说明该试纸条有较高的特异性。用该试纸条对GPMV、孔雀源NDV毒株，鸽源NDv毒株、新城疫Lasota株、鸡源NDv的尿囊液进行检测，均为阳性。证明其不仅与GPMv发生反应，还可以与不同易感动物源的NDv发生反应，可以广泛的应用到NDV的多种易感动物的检测。G

4、PMv胶体金免疫层析试纸条以免疫层析法为基础，利用抗原一抗体的特性，用一种新奇的方式进行快速诊断。由于这种方法快速、简便，易保存，不需要专业人员和特殊仪器，大大缩短了常规实验室检测所需时问，特别适台于广大基层单位、医院、野外作业人员以及大批量时间紧的检测和大面积普查等。关键词：鹅副黏病毒，单克隆抗体，免疫层析试纸条，胶体金DevelopmentofMcAbtoGPMVandtheStudyon1CStoDiaglloseGPMVAbstractInthisstud)，，weestablishar

5、apidandscnsitivesalldwichimmunochroJnatographicstrip(1cs)fbrgooseparamyxovims(GPMV)detectio“Par【oneisgetmemonocionalantibodies(McAbs)∞GPMVJG04s甘ainvimlentGPMVwaspuri6edbyPEG6000followcdbys印hdexG200columnchromatographv，protcnd．ViraJpro崩nl283mg／mL，HA29

6、、m．ImmuningBALBC／CmouseaIldcoa“ngELISAwithantigentllatispllrinedGPMVFunsionbyPEGl500，t11efusingratei暑465％；OIlrscreeningoftI坨h如ridomacellsbyiIldirectELISAandHI，Ihepositiverateis78．4％：Posi“vehybridomacellweresubclonedthreeCimesbyIimiteddilitionT、Ⅳohybr

7、idomacelllineswhichcallstablysecreteMcAb啪sobtaineda11ddesignated3A5and2C6．AndtheEUSAtitersof3A5incellsupernat锄tandAscitic、vcrel：5l200锄dl：512，noneHIdters；theELISAtitersof2C6incellsupematantandAsciticwcrel：6400锄d1：64，HItiterswerc24Ⅻd27．Partt、砌isdevelop

8、arapidalldsensitivesand、vichimmllIlochromalograpllics仃ipTri·sodiumcitratewilhaqueous90ld跚嘶dewcrewannedup蛐dmixedtomakegolds01：ThechickenIgG(觚ti_JG04s扭ainGPMV)waSimmobilizedtoadefineddetecti0Ilzone(T)0napomusnitrocellulosemembrane，wllile3A5wasconjugate