《her-2核酸适配子筛选鉴定及其对胃癌抗肿瘤活性的实验研

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1、《HER・2核酸适配子筛选鉴定及其对胃癌抗肿瘤活性的实验研究》可行性报告一、项目实施的背景和意义我省是胃癌高发地区乞一，尽管冃前胃癌发病和死亡有下降趋势⑴，但胃癌患者确诊时多已处于晚期，外科手术为主要治疗方法，5年生存率仅20-30%[2],半数以上患者出现局部复发或远处转移，且放疗和化疗均不能显著增加晚期胃癌患者的生存时间。因此，探索以全新高效的生物制剂为基础的胃癌综合治疗策略，己刻不容缓。基于关键信号通路的肿瘤靶向治疗被认为是一种有前途的手段，有证据表明络氨酸激酶受体人类表皮生长因子受体家族

2、(humanepidermalgrowthfactorreceptor,HER)中的HER-2过表达与包括胃癌在内多数肿瘤的发生、发展及预后密切相关⑶。曲妥珠单抗(trastuzumab,Herceptin)是一个以HER2/neu为靶点的人源化单克隆抗体，可以抑制HER2相关的乳腺癌等肿瘤的增殖。虽然前期临床试验证实，曲妥珠单抗能够有效抑制胃癌细胞生长⑷，但肿瘤耐药现象仍然存在⑸，故探讨其耐药机制及寻找其替代制剂以增进治疗效能及其重要。近年来，基于cell・SELEX(指数富集配体系统进化法)

3、新技术筛选出的HER・2核酸适配子(aptamer)在疾病的诊断和治疗中呈现岀良好的应用前景。适配子是一种人工合成的两端短的固定序列，因其对癌细胞的高亲和力和高特异性，以及体积小、免疫原性小、易于进行化学修饰等特点而优于抗体，可以弥补抗体在诊断及治疗领域中应用的不足。目前，适配子已经在肿瘤基础研究领域得到了应用，并已证实其对多种肿瘤具有抑制作用，而有关适配子在胃癌方面的研究尚处于起步阶段，面临着更大的拓展空间。新近在今年3月，国外学者已筛选获得乳腺癌细胞的HER-2核酸适配子⑹，但在胃癌方面的研

4、究却鲜有报道[7]o因而，我们设想通过SELEX技术筛选出HER・2核酸适配子，并经体外、体内实验证实其有效地靶向杀伤胃癌细胞效应，对于发现更为合理、高效的分子药物靶点有积极意义。项目申请者及合作者一直从事胃癌治疗及研究多年，最近的初步预实验表明，通过SELEX技术筛选的HER・2核酸适配子确实具有较强的体外抗癌活性，这些研究为胃癌的靶向治疗提供实验依据，也为本项目的顺利开展奠定基础。通过HER・2核酸适配子抗肿瘤活性及其机理的深入探讨，有助于新型抗肿瘤药物的开发，对胃癌等恶性肿瘤的诊断和治疗的

5、基础研究起一定的推动作用。二、项目涉及的相关技术在国内外的研究现状和发展趋势HER・2作为酪氨酸受体家族成员之一，主要通过Ras/MAPK、PI3K/Akt等通路参与细胞的增殖及抗凋亡，同时能促进基质金属蛋口酶(MMPs)分泌、激活VEGF的启动子，并激活丝氨酸/苏氨酸激酶(AKT)及核因子KB(NF-KB)等，促进肿瘤的浸润及转移。胃癌患者HER2过表达最早于1991年由Yonemura等报道，此后很多文献报道胃癌中HER2蛋白的过表达或基因扩增率约为7・34%［处〕。一项国际多中心随机对照I

6、II期临床研究(TOGA,trastuzumabforgastriccancer)的结果显示，化疗联合针对HER2的曲妥珠单抗治疗可显著延长进展期胃癌患者的生存期⑷，基于这一结果，2010年欧洲药品管理局及美国食品和药品管理局(FDA)先后批准化疗联合使用曲妥珠单抗治疗HER2阳性胃及胃和食管交界处癌患者。然而，进一步研究发现，HER・2单抗虽然能够有效抑制HER・2阳性胃癌细胞牛长，但肿瘤耐药现象仍然存在⑸。适配子是采用SELEX技术从人工合成的大容量随机寡核昔酸文库筛选出的能与靶分子特异结合

7、的寡核昔酸配体，其作用可与单抗媲美，但在皱感性、特异性方面有时优于抗体，且靶分子更广泛、性质更稳定、制备更简单且无批间差异，在疾病的诊断与治疗中有良好的应用前景，尤其在肿瘤基础研究领域得到了应用，其靶分子主要是一些癌症相关蛋白〔啊。目前核酸适配子已成为一类引人注目的新型靶向治疗药物，少数已进入临床试验阶段，Archemix公司生产的AS1411是第一个进入I期及II期抗肿瘤临床试验的核酸适配子，并已得到证实，其对多种肿瘤细胞株(如急性髓系口血病和肾癌细胞)具有抑制作用，且疗效良好叨。而在国内，H

8、ER・2在实体肿瘤中的相关研究也开始引起医学界的关注。张宇等何利用HER-2高表达胃癌细胞裸鼠移植瘤的研究中发现，应用HER能够有效抑制HER・2高表达胃癌细胞的作用。张俊等⑴】同样应用裸鼠胃癌移植瘤模型证实，四妥昔单抗(C225,cetuximab)可有效抑制裸鼠胃癌皮下移植瘤的生长及细胞增殖，促进细胞凋亡。同时，适配子在消化系统肿瘤的标志物及治疗等领域的研究应用中也有报道，如李真真等⑺建立SELEX技术筛选胃癌细胞SGC-7901适配子的方法，并初步鉴定获得的SGC-7901细胞适配子，从而