海洋微生物抗肿瘤活性菌株的筛选及其活性物质的研究.pdf

《海洋微生物抗肿瘤活性菌株的筛选及其活性物质的研究.pdf》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在工程资料-天天文库。

1、王雪玲海洋微生物抗肿瘤活性菌株的筛选及其活性物质的研究海洋微生物抗肿瘤活性菌株的筛选及其活性物质的研究摘要海洋由于其特殊的生态环境，具有丰富的生物物种资源，而这些生物物种蕴藏着许多宝贵的生物活性物质，海洋微生物由于特异性强、易于发酵培养等优点逐渐为人们所重视，成为研究的热点。本文用MTT法对来源于海洋的251株细菌进行细胞毒活性物质的筛选，并对高活性菌株No．657的代谢产物进行初步研究，为深入开发利用海洋微生物资源提供依据。主要结论如下：1．采用MTT法对分离自美国圣璜岛海域的251株海洋细菌进行了抗肿瘤活性的筛选，结果显示，54株海洋菌有较好的抗肿瘤活性，在测试

2、浓度为100llg／mL时，对HeLa细胞的抑制率均大于50％，占总测试菌株的21．5％，其中有7株菌株对HeLa细胞的抑制率在85％以上。在所有活性菌株中，菌株No．657的活性最强，其液体发酵及固体发酵的提取物，对HeLa细胞的ICs0分别为36．53llg／mL、3．19l上g／mL，固体发酵较适合于该菌株活性物质的产生。2．对菌株No．657进行菌株形态的观察和16SrDNA序列分析，鉴定该菌株为变形斑沙雷式菌Serratiaproteamaculans。3．以发酵产物的抗肿瘤活性及产量为指标，初步确定了对菌株No．657固体发酵的最佳培养条件：温度20．2

3、3℃，培养基初始pH值6．7；并且对培养基的配方进行了优化，通过N=12的Plackett．Burman(PB)试验设计筛选出影响活性物质产生的4个重要因子，并对该4个因子设计正交实验，得到重要性顺序为：NaCI>蛋白胨>MgS04>酵母粉，最佳培养基配方为：蛋白胨10．0g、酵母粉1．0g、NaCl19．45g，MgS040g。4．菌株No．657按照优化后的发酵条件进行批量发酵，并对其代谢产物进行了初步研究。通过薄层层析法和硅胶柱层析法对其代谢产物进行分离纯化，薄层层析法确定硅胶柱层析的流动相为二氯甲烷一甲醇体系，分离条件为纯二氯甲烷，二氯甲烷与甲醇比例100：

4、1，98：1，95：1，90：1，70：1，40：1，20：1，纯甲醇梯度洗脱。对柱层析分离产物进行活性追踪，发现100：1．95：1三个组分活性较好，其中98：1组分最强，其IC50为0．248l上g／mL，比粗提扬州大学硕士学位论文物活性提高了近13倍，且TLC分析表明98：1组分纯度最高。5．对活性最强的98：1组分进行化合物鉴定，通过气相色谱．质谱(GC．MS)及核磁共振氢谱(1H．NMR)分析鉴定其主要物质为灵菌红素。关键词：海洋微生物；抗肿瘤；活性物质；灵菌红素；鉴定II王雪玲海洋微生物抗肿瘤活性菌株的筛选及其活性物质的研究Screeningforthe

5、anti—-tumoractivityfrommarinebacteriaandresearchontheactiveproductsABSTRACTDuetoitsspeCialecologicalenvironment，oceanisrichinbiologicalspeciesresources，andthesemarineorganismscontainalotofvaluablebiologicaUyactivesubstances．Moreandmoreattentionhavebeenpaidontomarinemicroorganismsbecaus

6、eoftheirhigherspecificityandtheeaseoffermentation．Inthiswork，MTTassayWasusedtoscr∞nantitumoractiveagentsfrom251marinebacteria．AndthenapreliminarystudyabouttheisolationandidentificationoftheactivemetabolitesfromNo．657fermentsWasalsoconducted．Themainconclusionsofthestudyarelistedasfollow

7、s：1．Inthisstudy，byusingMTTassay，wescreenedfortheantitumoractivityfromsomemarinebacterialstrainswhichwereisolatedfromSanJuanIsland，theUSA．Theresultsshowedthat，among251testedbacterialisolates，54isolates(about21．5％)showedbetterantitumoractivity．TheirinhibitionratesagainstHeLacellattheco