海洋微生物生物活性菌株的筛选及菌株01299次级代谢产物的研究

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1、戀间為々秘Ｉ考硕±学位论文海洋微生物生物活性菌株的筛选及菌株０１２９９次级代谢产物的研究学科专业生药学学位类型囚科学学位．□专业学位研究生姓名何莎导师姓名、职称邱细敏教授论文编号湖南师范大学学位评定委员会办公室二〇—五年五月．分类号密级学校代码10542学号201202191501海洋微生物生物活性菌株的筛选及菌株01299次级代谢产物的研究ScreeningofBioactiveStrainsFromMarineMicroorganismsandStudytheSecondaryMetabolitestheF

2、romStrainof01299研究生姓名何莎指导教师姓名、职称邱细敏教授学科专业生药学研究方向天然产物化学湖南师范大学学位评定委员会办公室二〇一五年五月湖南师范大学学位论文原创性声明本人郑重声明：，是本人在导师的指导下所呈交的学位论文，独立进行研究工作所取得的成果。除文中己经注明引用的内容外，本论文不含任何其他个人或集体己经发表或撰写过的作品成果。对本文＾的研究做出重耍贡献的个人和集体１，均己在文中义明确方式标明。本人完全意识到本声明的法律结果由本人承担。学位论文作者签名：年＾月衣名日＾湖南师范大学学位论文版权使用授权书本学位

3、论文作者完全了解学校有关保留、使用学位论文的规定，研究生在校攻读学位期间论文工作的知识产权单位属湖南师范大学。同意学校保留并向国家有关部口或机构送交论文的复巧件和电子版，允许论文被查阅和借閒。本人授权湖南师范大学可Ｌ乂将本学位论文的全部或部分巧容编入有关数据库进行检索，可Ｌ义采用影印、缩印或扫描等复制手段保存和汇编本学位论文。／＾作者签養曰期：兴／年ｒ月曰＾ｊ导师签名：ｇ期：月＾ｇ＾Ｗ年＾７＾＾＆＾中文摘要目的：本文选取自中国南海及印度洋深海沉积物中分离鉴定的放线菌为研究对象，通过高通量发酵及活性和化学筛选，发现代谢产物丰富

4、，抑菌活性良好的目标菌株。结合不同模式的活性检测，对目标菌株进行进一步发酵、提取、分离和纯化其次级代谢产物，利用NMR、MS等现代波谱技术分析其分子结构，阐明目标微生物的活性来源，为开发和利用新的药用微生物资源提供理论依据。方法：①中科院海洋微生物研究中心微生物库选取的26株放线菌进行高通量发酵，以薄层色谱法（TLC）和高效液相色谱法（HPLC）确定次级代谢产物丰富的菌株；以抑菌试验为活性导向初步筛选出有活性的菌株；②将筛选出的目标菌株进行发酵，将粗浸膏依次以常压柱层析（正相硅胶、反相Rp-18硅胶）、中压制备色谱（MPLC）以及制备型高效液相色谱法(HPLC)

5、分离纯化；③用MS、NMR等现代光谱学方法鉴定单体化合物的结构；④测定单体化合物的抑菌活性、1,1-二苯基苦基苯肼(DPPH·)自由基清除活性和血管紧张素转化酶抑制活性。结果：菌株的生物活性筛选发现放线菌Pseudonocardiasp.SCSIO01299能产生丰富且有活性的次级代谢产物，将其确定为目标菌株，进行次级代谢产物的分离纯化和结构鉴定，共分离鉴定13个化合物，其中五个环二肽类：环（L-脯-L-酪）二肽(1)、环（L-脯-L-缬）二肽(2)、环（L-脯-L-苯丙）二肽(3)、环（L-缬-L-苯丙）二肽(4)、环（L-脯-L-亮）二肽（5）；一个二氮蒽醌

6、类：Deoxynyboquinone（6）；一个酯类：邻苯I二甲酸二乙二醇酯（7）；三个酸类：十四碳烷酸（豆蔻酸）（8）、4-羟基-3-甲氧基苯甲酸（香草酸）（9）、3，5-二甲氧基-4-羟基苯甲酸（丁香酸）（10）；一个醇类：吐叶醇（11）和两个苯并恶唑啉酮类：6-羟基-2-苯并恶唑啉酮（12）、2-苯并恶唑啉酮（13）。化合物1~10的活性测试表明，化合物3和5具有1,1-二苯基苦基苯肼(DPPH·)自由基清除活性，IC-1-150值分别为：9.48μmol·mL和2.85μmol·mL；化合物4具有血管紧张素转化酶抑制活性，IC-150值为0.72μmol

7、·mL；化合物6对金黄色葡萄球菌、藤黄微球菌、枯草芽孢杆菌有抑制作用，最小抑菌浓度分别为：0.025mmol·L-1，0.05mmol·L-1，0.05mmol·L-1。结论：本研究对海洋来源放线菌的次级代谢产物及其活性进行探索，发现了两株具有丰富代谢产物和良好活性的菌株，并以菌株01299为对象分离的单体化合物显示较好的活性，为这个菌株的进一步开发利用提供了科学理论基础。关键词：放线菌；次级代谢产物；生物活性IIAbstractObjective:TostudythesecondarymetabolitesofActinomycetesfromthesouth

8、Chinasea’sde