欢迎来到天天文库
浏览记录
ID:30967814
大小:4.42 MB
页数:10页
时间:2019-01-04
《e2-2基因腺病毒载体的构建及其对epcs生长,增殖及id1表达的影响》由会员上传分享,免费在线阅读,更多相关内容在工程资料-天天文库。
1、E2-2基因腺病毒载体的构建及其对EPCs生长、增殖及ID1表达的影响刘晓丽,杨海捷,谭志胜,苏勇,朱琴,王红(650032昆明,成都军区昆明总医院干部病房)[摘要]目的构建转录因子E2-2基因腺病毒载体,并观测内皮祖细胞(endothelialprogenitorcells,EPCs)过表达E2-2基因对DNA结合抑制因子-1(inhibitorofDNAbinding/differentiation,ID1)表达的影响。方法 分离、培养并鉴定小鼠骨髓EPCs。RT-PCR法扩增E2-2基因CDs全长DNA,克隆入载体pTG19-T后,亚克隆入腺病毒穿梭载体pAdTrack-CMV中,构建p
2、AdTrack/E2-2重组载体,与pAdEasy-1骨架质粒同源重组形成重组病毒pAd/E2-2,经293细胞包装,获具高效感染力的重组pAd/E2-2病毒。将该病毒感染EPCs,倒置显微镜观测经感染的EPCs的GFP表达情况。CCK-8(cellcountkit-8))法检测病毒pAd/E2-2对EPCs生长、增殖的影响。RT-PCR、Westernblot分别检测经感染的EPCs中E2-2与ID1基因及其编码蛋白的表达情况,并予以定量分析。结果分离、培养并鉴定到小鼠骨髓EPCs。克隆到2013bp的E2-2基因,并获得高效感染力的重组pAd/E2-2病毒。CCK-8法检测表明,与对照比较
3、,过表达E2-2的EPCs的生长、增殖速度减慢,48h开始变得尤为明显(P<0.01);RT-PCR、Westernblot及定量分析结果显示,E2-2能下调ID1的表达,与对照比较,差异具统计学意义(p<0.01)。结论分离、培养并鉴定到小鼠骨髓EPCs。克隆到E2-2基因,证实了E2-2能明显抑制EPCs的生长、增殖,并能下调ID1基因的表达。[关键词]EPCs;E2-2基因;ID1基因;腺病毒[中图法分类号][文献标志码]AConstructionofadenovirusvectorofE2-2geneanditseffectsontheexpressionofID1geneLiuXia
4、oli,YangHaijie,TanZhisheng,SuYong,ZhuQin,WangHong(militaryunitscadresinKunmingGeneralHospitalofchengdumilitaryregion,Kunming650032)[Abstract]ObjectiveToconstructtheadenovirusvectorofE2-2geneandinvestigatewhethertheadenovirusvectorcarryingE2-2geneaffectingtheexpressionofID1geneinendothelialprogenitor
5、cells(EPCs).MethodsMurineEPCsofbonemarrowshouldbeisolated,culturedandidentified.cDNAfragmentencodingmurineE2-2genewasamplifiedbyreversetranscriptase-polymerasechainreaction(RT-PCR).ThePCRamplifiedfragmentofE2-2genewasfirstclonedintopTG19-Tvector,andthensubclonedE2-2geneintotheshuttlevectorpAdTrack-C
6、MVforconstructingtherecombinantplasmidspAdTrack/E2-2,whichhomologouslyrecombinatedwiththeadenoviralbackbonevectorsAdeasy-1togeneraterecombinantadenoviralplasmidsAd/E2-2.TherecombinantadenovirusesAd/E2-2,whichwereemployedtoinfectEPCs,weregeneratedbytransfectingtherecombinantadenoviralDNAinto293cells.
7、Theexpressionofenhancedgreenfluorescentprotein(EGFP)intransfectedEPCswereobservedunderinvertmicroscope.ThegrowthandproliferationoftransfectedEPCsweretestedviaCellcountkit-8(CCK-8),andtheexpreesionofE2
此文档下载收益归作者所有