prrsv呼吸征疫苗制作概述

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1、PRRSV呼吸征疫苗制作概述-->第一章猪繁殖与呼吸综合征研究进展1.1猪繁殖与呼吸综合征猪繁殖与呼吸综合征（PRRS），在20世纪80年代被发现，一种由猪繁殖与呼吸综合征病毒（Porcinereproductiveandrespiratorysyndromevirus，PRRSV）引起的病毒性传染病。此病可引起受孕母猪体温高温，食欲下降，流产，生死胎或者木乃伊胎，弱仔等繁殖性障碍，新生仔猪（特别是断奶前仔）猪高死亡率以及各年龄段（尤其是仔猪）的呼吸道疾病，并以此为显著特征[1]。最早在1987年，美国南部就已经爆发此病，随后迅速蔓延全美，使美国经济受到严重的

2、损失。不久后的2年内，此病在北美和欧洲国家迅速蔓延。北美洲及欧洲国家也前后报导发生此病[2]，[3]，[4]，并且在1989年该病在北美洲到达高峰。随后，这一“神秘猪病”在世界范围内迅速蔓延[5]。从1991年起，亚洲的一些地区例（如日本、韩国等）也相继爆发此病[6]。1992年世界动物卫生组织（OIE）将该疾病列为B类传染病[6]。我国于报道此病的时间相对较晚。1996年，由哈尔滨兽医研究所第一次从猪群中分离到4株PRRSV[7]，进而证明PRRS在我国的实际存在。从06年5月份开始，我国湖北、湖南、江西等南方省份爆发高致病性猪蓝耳病[8]，给我国的养猪业造

3、成极为严重的经济损失，在此期间至少200多万头猪发病和40多万头猪死亡，引起了社会的广泛关注。鉴于该病的严重危害性，2008年底在我国新修订的《一、二、三类动物疫病病种名录》中将此病列为一类动物疫病[9]。......1.2PRRS的流行病学目前，PRRS已是世界性的分布，而且危害及其严重。而且PRRS的发生与季节无明显的关系，一年四季内均可发生。猪是PRRS的易感染宿主并且会表现临床症状。到目前为止，还未发现其它的能表现临床症状的易感动物。该病的感染在猪的品中和年龄之间无明显差异。PRRS可引起猪群多系统病症，在感染猪群后又会造成其他病原微生物的持续性感染，

4、这是PRRS在流行病学上的特点。病毒具有高度的感染性，10个病毒颗粒甚至更少都可能感染猪体发病[10]。PRRSV感染母猪多有非常严重的繁殖障碍（流产、早产、死胎、木乃伊胎），以及各年龄阶段猪的呼吸道疾病并且造成较高的死亡率。感染母猪的死胎率可达20％-60％[11][12]，仔猪的死亡率为80％[13]。除此，PRRSV的感染还会造成机体免疫体系的失衡，继发细菌或病毒感染。比如在猪群感染PRRSV后，还会相继产生猪链球菌[14]、猪圆环病毒2型[15]、猪流感病毒[16]等病原微生物的感染。成年猪和仔猪是PRRSV的最为主要的宿主[17]，一般来讲仔猪的感染

5、率是最高的。有学者在猪群分离PRRSV时，结果以6-8周龄的仔猪的分离率最高[11]。隐性带毒猪，康复猪，感染母猪及其仔猪是PRRS病毒的主要传染源。病毒主要通过他们的体液和排泄物排出体外，感染病猪在临床症状消失8周后仍就可向外排毒，甚至可带毒长达16个月之久[12][18]。甚至通过鼻对鼻的接触方式，非妊娠的持续感染母猪就可以将PRRSV传染给非感染的PRRSV的隐性母猪[19]。.........第二章猪繁殖与呼吸综合征病毒纯化技术研究2.1病毒纯化技术2.1.1超过滤膜分离技术原理病毒培养液中病毒、杂蛋白（主要是血清白蛋白等动物蛋白）和DNA片段是大分子

6、物质，它们不能透过超过滤膜，而病毒培养液中小分子物质（无机盐、单糖等）可以自由通过超过滤膜进入到透过液中[55]。本次试验分离纯化病毒的过程中，连续流动避免了病毒等大分子物质堆积在膜表面而阻塞膜孔，使得浓缩的大分子物质得以回收，小分子物质在透过滤膜后，最终去除。但是收获浓缩病毒的同时，病毒培养液中的杂蛋白、DNA片段等杂质也得到回收，这些杂质的存在给疫苗的安全性带来隐患，需要将其去除。因此，在浓缩完毕后，对浓缩毒液进行超滤透析工艺，通过不断加入的稀释液，利用超滤过程中的机械力，将病毒液小分子蛋白洗脱下来，带入透过液中去除，而完整病毒粒子得以保留，从而达到去除部

7、分杂蛋白、DNA片段等杂质，纯化病毒的目的。超过滤膜分离技术属于切向流过滤技术（TangentialFlol注射器、0.2μm圆盘式塑料过滤器（PALL）、96孔细胞板若干、移液器、移液枪头若干、计时器等。2.2.5实验设备超滤切向流系统一台；Maxisette50KD膜包；0.45μm滤芯和0.22μm滤芯若干，配套滤壳，以上均由美国PALL公司生产购入。Ph计、倒置显微镜、CO2培养箱等常规实验仪器。2.3试验方法2.3.1准备工作2.3.1.1将1批合格病毒培养液有由冷库提出，用水浴法进行化冻，中间注意摇动，使毒液尽量融化，并保持在4-8℃，防止病毒效力

8、因温度损失。2.3.1.2按1.1.4