表达prrsv呼吸症病毒多表位肽重组猪痘病毒概述

《表达prrsv呼吸症病毒多表位肽重组猪痘病毒概述》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在学术论文-天天文库。

1、表达PRRSV呼吸症病毒多表位肽重组猪痘病毒概述-->1PRRSV的细胞受体猪繁殖与呼吸综合症病毒(PRRSV)是一种具有囊膜的+ssRNA病毒,与马动脉炎病毒(equinearteritisvirus,EAV)、鼠乳酸脱氧酶增高病毒(lactatedehydrogenase-elevatingvirus,LDV)以及猴出血热病毒(simianhemorrhagicfever,SHFV)同属动脉炎病毒科动脉炎病毒和冠状病毒具有相同的基因组织结构和蛋白表达策略,因此在病毒分类学上二者同属于尼多病毒目(或称为亚基因簇病毒,Nidoviraksf、1989年Keffaber首次报道猪繁殖与呼吸综

2、合症(PRRS)[2],1991年acrophages,PAM)。PRRSV可以在骨髓衍生树突细胞和单核细胞衍生树突细胞中增殖,但不能在肺部的树突细胞中增殖体外增殖PRRSV的细胞系局限在非洲绿猴肾细胞系MA104及其衍生细胞系MARC145和CL2621。已经确定了一些分子可能是PRRSV潜在的细胞受体或协助受体。硫酸类肝素(heparinsulfate,HS)、猪唾液酸粘附素(porcinesialoadhesin,PoSn)和清道夫受体蛋白家族中的CD163分别参与病毒的吸附、内化和脱壳过程[11]。由于未活化的单核细胞不表达PoSn,病毒不能在其中增殖[10]。转染PoSn还不足以

3、使PRRSV在PK15中增殖,可能由于却少CD163无法完成脱壳[12]。转染CD163到一些不能增殖PRRSV的细胞系,如人U937细胞系和Vero细胞系,使这些细胞容易感染PRRSV,这暗示了CD163并不是病毒吸附受体而是介导病毒脱壳[13]。最近有研究结果表明转染CD163可使I型和II型PRRSV在不能增殖的细胞系中增殖。利用IL-10刺激CD14+单核细胞表达上调CD163,能提高PRRSV的感染效率[i4]。或未成熟的树突细胞中,会暂时抑制TLR3和TLR7的表达。但当体内感染PPRSV来检测TLR3的表达时,结果却相反Sang等在取自感染后两周仔猪的PAM中发现TLR3的表

4、达量增加[21]。Liu等也发现在受感染猪的淋巴组织中TLR3、以及TLR2、TLR4、TLR7/8的表达量都有所提高[22]。最近,Miguel等在实验室感染八周后猪的淋巴结和脑部的一些区域也发现,TLR3、TLR4和TLR7的表达量上升,暗示PRRSV感染可能会影响脑部的先天性免疫应答[23]。Sang和Miller等都发现用化学剂或外源dsRNA能激活TLR3信号途径,削弱病毒增殖。当勒细胞发生突变或强制降低表达TLR3时,PRRSV复制增强。相反,LPS处理PAM后虽然激活TLR4依然能发生PRRSV感染。Calzada-Nova等分析指出PRRSV可能通过干扰TLR7和TLR9信

5、号通路导致不能诱导装细胞样DC分泌多种细胞因子........2.21型干扰素应答早期研究表明,IFN-a能控制PAMPRRSV增殖,而在受感染猪体内IFN-a水平很低,且仪在呼吸道检测得到。通过检测猪体内IFN-Y水平得到同样的结果[25]。Miller等发现用dsRNA诱导,PRRSV能抑制Marcl45表达I型干扰素,说明PRRSV可能会干扰TLR3途径通路。Loving等也发现IFN-ct能抑制PRRSV的复制但不影响病毒的内化过程[26]。Lee等的研究表明PRRSV对IFN-a的敏感性因不同病毒分离株而异,甚至在同一分离株的不同克隆间也不同,这表明遗传多样性和准种在其不同敏感性

6、中的作用。即使诱导IFN-a最强的PRRSV克隆也不能与传染性胃肠炎病毒诱导PAM释放IFN-a的水平相比,前者低于8U/ml,后者高于〉35U/mP。根据以上观察到得实验结论,PRRSV可能是通过正向反馈调节增强IFN应答。由于转录因子IRF-7的积累,弱IFN-a/p信号能增强IFN-a/p合成有关PRRSV抑制I型IFN分泌机制的研究重点集中在NF-KB。NF-KB是一种可诱导的转录因子,是参与I型IFN、致炎性细胞因了以及其他与免疫应答有关的分子合成途径的核心PRRSV能通过降解IkB激活NF-KB。PRRSV能失活IFN-p启动子刺激因子l(IFN-ppromoterstimul

7、ator1,IPS-1),IPS-1是RIG-I信号途径中的衔接分了-,阻止M-->arcIFN-p的表达Beura等发现PRRSV的非结构蛋白,特别是NSPl-ouNSP1-P、NSP-2、NSP-4和NSP-11具有极强的IFN抑制活性。..........第三章多表位肽HP基因的设计及原核表达........271材料与方法........281.1材料........281.2施........282.1PCR鉴