猪瘟疫苗的概述及制作过程.ppt

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1、猪瘟疫苗的概述及制作过程08动医班401宿舍猪瘟疫苗生产历程1956—1957猪瘟脾淋组织苗（湿苗）1958—1959猪瘟脾淋组织苗（湿苗）1959—1963猪瘟脾淋组织冻干苗1964—1971猪瘟乳兔组织苗（湿苗）猪瘟牛体反应苗（湿苗）1972—1973猪瘟乳兔组织苗（湿苗）猪瘟牛体反应苗（湿苗）1974—1975猪瘟乳兔组织冻干苗1976—1981猪瘟乳猪肾细胞冻干苗1981—1983猪瘟乳兔组织冻干苗1982—1987猪瘟羊肾细胞冻干苗1987—2002猪瘟牛睾丸细胞冻干苗2002至今猪瘟牛睾丸细胞冻干苗猪瘟脾淋组织冻干苗猪瘟疫苗系列1.猪瘟细胞苗（1）普通苗（

2、2）零免苗（3）精制苗（4）政府采购专用苗2.猪瘟脾淋苗（1）普通苗（2）政府采购专用苗我国猪瘟的流行特点流行范围广呈散发流行趋势发病年龄小，成年猪带毒现象严重非典型和繁殖障碍型猪瘟增多免疫失败现象严重与猪蓝耳病、猪园环病毒病、猪伪狂犬病、猪链球菌病、猪肺疫等并发或继发感染我国猪瘟疫苗的特点我国的猪瘟疫苗是用中国系猪瘟兔化弱毒株（简称C株）生产的，它是我国于20世纪50年代初期，从河北省石家庄地区的患猪瘟的病猪中分离到的一株猪瘟强毒，称为石门株（Shimenstrain），将该强毒株通过大耳白兔经历4年多时间，传代至430代，使毒力减弱成为疫苗株，即C株。C株的特点：

3、①免疫原性良好，经肌肉注射可产生坚强的免疫力，并可维持1~2年。②免疫力产生快，48小时产生完全免疫力，96小时产生坚强免疫力。③安全性高，反应小，各种类型的猪均可使用，剂量加大至10~20头份甚至更大无明显不良反应。④稳定性好，不变异，不散毒，不返祖。C株疫苗早已是被世界公认的优秀疫苗，并在国内及其它国家广泛应用获得很高的评价。猪瘟免疫失败的原因疫苗质量不高疫苗管理不当免疫程序不合理猪群中存在其它免疫抑制病感染母猪持续感染和仔猪胎盘感染——是免疫失败的重要原因猪瘟亚临床感染→胎盘感染→母猪繁殖障碍→仔猪带毒→后备母猪→亚临床感染免疫后过敏反应时有发生猪瘟疫苗的制作过

4、程一、细胞培养1、制苗用细胞牛睾丸细胞或羊肾细胞。2、生长培养液目前的细胞培养液为乳汉（欧）液，或MEM＋10%新生牛血清+1%双抗（青/链霉素），pH7.0～7.2左右。3、维持液目前的维持液为乳汉（欧）液，或MEM＋2～5%新生牛血清+1%双抗（青/链霉素），pH7.4～7.6。细胞生长良好的几个注意事项（1）制苗用细胞应选用非猪瘟疫区，无口蹄疫、粘膜病等传染病地区的1～4日龄健康小公牛或10日龄以内的健康羔羊。其家H健康生长的（2）培养基和血清的质量可靠、稳定。应确保无外源病毒、支原体、细菌等污染，无牛病毒性腹泻病毒（BVDV）及其抗体。用于生产猪瘟细胞苗的牛血

5、清都要事先检测有无BVDV中和抗体的存在。（3）制备原代牛睾丸细胞时，防止细胞消化过度。（4）合适、营养丰富的细胞培养基。丰富的营养成分对细胞的生长、带毒状态维持和毒价的提高有直接影响。（5）转瓶的洗涤应遵循严格的清洗程序。转瓶洗涤不干净，容易导致细胞不贴壁生长。二、病毒感染、维持和收获1.生产用毒种有脾毒和细胞毒，脾毒是用选择定型热反应兔脾脏冷冻或冻干保存制备的；细胞毒是将用新鲜脾毒制成0.3%～0.5%的病毒悬液接种生长良好的牛睾丸细胞或羊肾单层细胞，取二收、三收的细胞培养液作为生产用毒种。脾毒应选择兔体反应在36小时之前，同时防止脾毒采集过程的污染。该病毒不产生

6、细胞病变效应(CPE)，可连续多次收液。取已形成良好单层的牛睾丸细胞（或羊肾细胞），弃去培养液，接种含3%～5%细胞毒种或0.2%～0.3%脾毒种的维持液。接毒后4或5日第一次收获换液，以后每4－6日收获换液1次，可连续12～15收左右，有的厂家可收更多。一般来说，12～15收前的毒价合格率高，疫苗质量好。接毒时，细胞生长状态的好坏影响细胞产毒。也可对细胞带毒分散，分散比率1：4左右，可增加收次和产量。将检验合格的病毒培养液和5%蔗糖脱脂牛奶稳定剂按一定比例混合，分装，进行冻干。猪瘟病毒的病毒特征1、猪瘟病毒（HCV）感染细胞超薄切片的电子显微镜观察表明，该病毒颗粒在

7、膜结合的胞浆内空胞中装配并成熟，然后经胞外释放。2、56℃处理60分钟或60℃10分钟可灭活细胞培养液中的HCV。HCV在pH5～10时稳定，pH5.2时最适宜生长，但在低于pH4或高于pH11时快速灭活。3、猪瘟病毒的抗原性和血清学与牛粘膜/病毒性腹泻病毒(MD/BVDV)密切相关，两者同源性很高，能互相诱导一定程度的同源病毒抗体，细胞或培养液中若存在牛病毒性腹泻病毒(BVDV)及其抗体，可与猪瘟病毒发生中和反应，造成疫苗生产的失败。病毒收获液毒价不高的可能原因如果病毒收获液毒价不高，即病毒家兔感染量（RID）较低，制成的疫苗易造成免疫失败。猪瘟疫