实验性变态反应性脑脊髓炎与细胞凋亡

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1、实验性变态反应性脑脊髓炎与细胞凋亡　　摘要：实验性变态反应性脑脊髓炎(EAE)是研究人类多发性硬化(MS)的经典动物模型，EAE发病和愈复过程中细胞凋亡的情况也是目前神经生物学的研究热点。研究者们发现，EAE时S损伤区有自身反应性T淋巴细胞的凋亡，而且这种细胞凋亡促进了EAE的愈复和耐受状态的形成，这就为EAE乃至人类MS的防治提供了一条新思路。有关EAE其他细胞凋亡和影响细胞凋亡的因素也有一些研究。本综述对近年来这些方面的研究进展做了较为全面的回顾。　　实验性变态反应性脑脊髓炎（experimentalautoimmuneencephalomyelitis,EAE）是T细胞介导

2、的中枢神经系统（centralnervoussystem,S）脱髓鞘疾病，是人类脱髓鞘疾病——多发性硬化（multiplesclerosis,MS）的经典动物模型。研究EAE的发病及愈复机制，对于MS的预防和治疗都有重要意义。有关EAE发病机制的研究近年来有以下进展：（1）介导EAE发病的淋巴细胞更具体地归类为CD4+Vβ8.2+T细胞；（2）淋巴细胞产生的细胞因子如IL-2、IL-4、IL-10、TNF、IFN-γ、TGF-β等，直接参与炎症反应或反应的修复；（3）NO参与EAE的发病，但不同的研究者用不同的动物和诱导方式以及不同的NOS拮抗剂，得出不同结果［1，2］，因而NO

3、的作用有待进一步明确；（4）Fas/Fas-L系统促进少突胶质细胞的损伤，参与EAE的发病［3-6］；（5）细胞凋亡(apoptosis)与EAE发病有关，尤其在EAE的愈复和免疫耐受形成中起重要作用。　　细胞凋亡与免疫系统的关系极为密切，淋巴细胞的凋亡涉及到自身免疫性疾病的康复及耐受机制的形成。对于EAE也不例外。　　早在60年代中期，就有人发现EAE病程中有细胞死亡，并认为是少突胶质细胞、单核细胞和淋巴细胞死亡。随着凋亡概念的出现和检测技术的发展，Pender等从形态学上证实EAE中的细胞死亡以凋亡的形式出现，并认为其中有少突胶质细胞，而后又发现更多的凋亡细胞是T淋巴细胞，还

4、有一些为巨噬细胞［7］。这些研究成果激起学者们的浓厚兴趣，促进了对此问题的深入探讨。　　目前，对凋亡淋巴细胞的进一步分类、影响凋亡的因素以及凋亡的意义等，都有了很多新的发现。　　1　EAE中凋亡的细胞　　1.1　少突胶质细胞　Pender等在证实EAE病程中有细胞凋亡存在的同时发现：凋亡细胞出现在S的灰质和白质中；白质中的凋亡细胞与正常的有髓纤维毗邻，慢性EAE中则与脱髓鞘的纤维毗邻；灰质中的凋亡细胞与神经元胞体和髓鞘毗邻；在含有髓鞘碎片、毗邻脱髓鞘轴突的巨噬细胞中有凋亡的细胞体。前人也曾注意到，Cuprizone中毒小鼠S中正在死亡的少突胶质细胞有明显的染色质边集和核分裂，形成

5、几个大的致密团块。于是，根据凋亡细胞的大小和位置，Pender等推测凋亡的细胞为少突胶质细胞。但是，对于这种细胞的定性，却没有更具说服力的证据。曾有人提出不同观点，认为EAE时少突胶质细胞不是凋亡，而是细胞溶解。用TUNEL技术检测EAE的凋亡细胞，也未检测到呈阳性反应的少突胶质细胞，从而否定了少突胶质细胞的凋亡［8］。　　1.2　淋巴细胞　Pender等虽然没有为少突胶质细胞的凋亡提供更多的证据，但在提出“EAE的S中可能有特异性淋巴细胞的凋亡”后又进行了一系列的研究。1992年他们使用包埋前免疫标记技术发现，S中10%CD4+细胞和5%αβT淋巴细胞发生凋亡。而凋亡细胞中，5

6、1%被OX-34标记，38%被R73标记。由此得出结论：急性MBP诱导的EAE,脊髓中的凋亡细胞至少一半以上是T淋巴细胞，并很有可能是自身反应性的、MBP激活的特异性T淋巴细胞(即MBP-特异性T细胞)。其他研究者也发现，脑损伤区的凋亡细胞64%为T淋巴细胞。1994年他们在被动转移的EAE模型用流式细胞仪分析细胞表型和DNA，证实了自身反应性T细胞的凋亡［9］。该研究发现，Vβ8.2+T细胞在凋亡细胞中的比例是其在正常T淋巴细胞群中的7倍，显示出凋亡细胞中Vβ8.2+细胞的高度聚集，得出“自身反应性Vβ8.2+T细胞以凋亡的方式从靶器官中选择性消除”的结论。在主动诱导的EAE也

7、得到类似的结果［10］。1995年他们使用有限稀释法分析发现，被动转移的EAE在发病高峰期脊髓中MBP-特异性淋巴细胞，即Vβ8.2+T细胞达最高比例（1146个细胞中有1个）；到恢复期，其比例则奇迹般地降至每105个细胞中1个；同时检测的卵白蛋白(OVA)-特异性T淋巴细胞的比例,在两个时期改变程度较小［11］。这种恢复期Vβ8.2+T细胞特异性下调的现象，进一步证实了前面的观点［9］。1998年，他们检测了介导凋亡的蛋白，发现Vβ8.2+细胞中，Fas+和Fas-L+的细胞分