雌激素对实验性变态反应性脑脊髓炎保护作用的研究

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1、l雌激素对实验性变态反应性脑脊髓炎保护作用的研究摘要目的：1．观察雌激素对实验性变态反应性脑脊髓炎(experimentalallergicencephalomyelitis，EAE)的保护作用2．探讨雌激素对EAE保护作用的免疫学机制。方法：将40只雄性Wistar大鼠随机分成4组：正常对照组、EAE对照组、大剂量雌激素组和小剂量雌激素组，每组各10只。采用粗制髓鞘碱性蛋白(myelinbasicprotein，MBP)抗原注入EAE对照组及大、小剂量雌激素组大鼠后足掌皮下(O．2ml／1009)制作EAE模型，正常对

2、照组注射等量生理盐水。自造模之日开始，小剂量雌激素组给予皮下注射苯甲酸雌二醇25099／kg．d，大剂量雌激素组每日皮下注射苯甲酸雌二醇lmg／kg．d，正常对照组及EAE对照组每日皮下注射lmg／kg．d橄榄油，连续10天。EAE对照组及大、小剂量雌激素组连续3天症状评分无加重或四肢瘫痪、死亡时作为EAE发病高峰期。记录发病大鼠的发病率、发病潜伏期、进展期和高峰期神经功能障碍评分。于发病高峰期处死大鼠，正常对照组4周后处死，留取大鼠眶静脉血、脑脊髓组织。脑脊髓组织经处理切片行HE染色，光学显微镜下观察病理变化；免疫组化

3、技术和平均光密度测定法检测各组大鼠脑和脊髓白质组织内CD44的表达情况；用酶联免疫吸附(enzyme—linkedimmunosorbentassay，ELISA)法检测外周血单个核细胞(peripheralbloodmononuclearcell，PBMC)分泌IFN-丫、IL．4水平和高峰期脑组织细胞因子IL．10含量。采用放射免疫法测定正常对照组、EAE组和各治疗组高峰期脑组织细胞因子IL．1p、IL一2、IL．6、TNF．0c含量。结果：(1)大鼠发病情况：正常对照组大鼠未1发病。EAE对照组均有不同程度发病，发

4、病率100％；大、小剂量雌激素组部分动物发病，小剂量组发病率为80％，与EAE对照组比较差异无统计学意义(P>O．05)，大剂量组发病率为50％，较EAE对照组增高(PO．05)；EAE对照组发病潜伏期为11．6±2．5天，小剂量雌激素组潜伏期(17．5±1．6天)较EAE对照组延长，差异有统计学意义(尺O．01)，大剂量雌激素组潜伏期(24．24-3．0天)较EAE对照组及小剂量雌激素组均明显延长(尺O．01)；EAE对照组发病进展期为7．44-1．7天，小剂量雌激素

5、组进展期(5．1±1．4天)较EAE对照组明显缩短(尸

6、剂量雌激素组大鼠脑及脊髓病理学改变：正常对照组大鼠脑和脊髓无异常。EAE对照组大鼠高峰期可见脑及脊髓实质内小血管充血，血管周围主要是小静脉周围有大量炎性细胞浸润，主要为单个核细胞浸润，典型者形成“袖套”状改变，血管周围白质脱髓鞘改变。而各雌激素治疗组病理改变较轻，其中大剂量组最轻。(3)EAE对照组、大小剂量雌激素组大鼠CNS内CD44表达情况：CD44表达部位主要在大脑、脑干、脊髓白质及灰白质交界的小血管周围。其主要分布在神经细胞胞浆，CD44高表达部位的炎症表现较重。正常对照组大鼠CNS内未发现CD44阳性细胞；EA

7、E对照组大鼠CNS白质2及灰白质交界处可见大量阳性细胞，呈棕黄色浓染颗粒，着色较深；大小剂量雌激素组大鼠CNS内仅有少量散在淡染的阳性细胞。图像分析结果显示，与大剂量雌激素组及小剂量雌激素组比较，EAE对照组CNS白质CD44表达水平均明显升高(P<0．01)；与小剂量雌激素组比较，大剂量雌激素组CNS白质的CD44表达水平显著降低(P

8、Y水平为O．69±O．07ng／ml，EAE对照组较正常对照组明显升高(尸