降纤酶对实验性变态反应性脑脊髓炎保护作用的研究.pdf

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1、目录1降纤酶对实验性变态反应性脑脊髓炎保护作用的研1．1中文摘要⋯：⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．．11．2英文摘要⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯61．3前言⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．：⋯⋯．141．4材料与方法⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯171．5结果⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯251．6讨论⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯441．7结论⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯591．8参考文献⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯601．9英汉缩略词对照表⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯

2、⋯⋯⋯⋯⋯7l2致谢⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯733纤维蛋白在多发性硬化中的研究进展(综述)⋯⋯⋯⋯⋯744研究生在读期间发表的论文⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯84降纤酶对实验性变态反应性脑脊髓炎保护作用的研究摘要目的：通过观察降纤酶(DF)对实验性变态反应性脑脊髓炎(EAE)大鼠发病情况、脑及脊髓病理改变、纤维蛋白沉积、活化星形胶质细胞、基质金属蛋白酶．9(MMP．9)的表达、血脑屏障(BBB)的功能、脑组织匀浆肿瘤坏死因子．0【(n师．伐)含量、血浆组织型纤溶酶原激活剂(tPA)、纤溶酶原激活物抑制剂(PAl)水平的影响，探讨DF对EAE的保护作用及其

3、可能的免疫学机制，为治疗多发性硬化(MS)寻找新的药物。方法：1．分组、造模及给药：采用粗制碱性髓鞘蛋白(CMBP)加福氏完全佐剂(CFA)皮下注射的方法建立EAE模型，EAE模型分为DF高、中、低剂量治疗组和EAE对照组，每组lO只；正常对照组lO只，按EAE模型组的方法注射生理盐水及CFA。自造模前一周开始给药，正常对照组及EAE对照组腹腔注射生理盐水0．3ml／d，DF低、中、高剂量治疗组分别按4u／kg．d、8u／kg．d、16u／kg．d剂量行腹腔注射，连续注射十天，于EAE对照组、DF各治疗组连续3天症状评分无加重或四肢瘫痪、死亡时作为EAE发病高峰期处死发病大

4、鼠，濒死大鼠在尚有心跳、体温时处死，其余至观察8周结束时全部处死。2．观察大鼠发病情况、潜伏期、进展期和高峰期神经功能障碍评分及死亡率的变化。3．采用光镜观察各组大鼠脑及脊髓组织病理变化。4．采用免疫组化染色法检测脑组织MMP．9阳性表达，计数阳性细胞数；抗纤维蛋白原(Fig)、抗胶质纤维酸性蛋白(GFAP)免疫组化染色分别检测纤维蛋白沉积、活化星形胶质细胞的表达，并计算Fig免疫组化阳性面积、GFAP的平均光密度值(IOD)，观察DF对纤维蛋白沉积、星形胶质细胞反应、MMP．9表达的影响。5．测定血清和脑脊液中蛋白含量，并计算血清与脑脊液蛋白含量比值(QA)，通过QA评定

5、BBB的功能。6．采用ELISA法检测脑组织匀浆TNF．0【的含量、血浆tPA和PAI的水平。7．将EAE对照组和DF低、中、高剂量治疗组各指标进行相关性分析。8．所有数据采用SPSSl7．0进行统计分析。结果：1．大鼠发病情况：(1)临床症状：正常对照组大鼠无异常表现；EAE对照组及DF高、中、低剂量治疗组所有的大鼠均发病，潜伏期10．30天不等，发病大鼠先后出现进食减少、体重下降、萎糜、后肢无力、自伤后肢、后肢完全不能活动等表现，严重者四肢瘫痪、抽搐，甚至死亡。(2)潜伏期变化：DF各治疗组的潜伏期较EAE对照组延长(尸均<0．01)；高、中剂量治疗组较低剂量组延长(氏

6、O．01、P<0．05)，高剂量治疗组潜伏期较中剂量治疗组延长(氏O．01)。(3)进展期变化：DF各治疗组进展期与EAE对照组相比明显缩短(P均<0．01)；DF高剂量治疗组较低剂量治疗组明显缩短(氏O．05)。(4)发病高峰期神经功能障碍评分变化：DF各治疗组发病高峰期神经功能障碍评分较EAE对照组明显降低伊均<0．01)；高、中剂量治疗组较低剂量治疗组降低(尸<0．01、P<0．05)，DF高剂量治疗组较DF中剂量治疗组降低(尸

7、亡率LhEAE对照组低，但差异无统计学意义(尸>0．05)，DF高、中剂量治疗组死亡率比较无统计学差别(胗O．05)。2．脑及脊髓病理变化：EAE对照组及DF高、中、低剂量治疗组大鼠的脑和脊髓都出现了EAE典型的病理改变，小血管周围炎性细胞浸润，呈袖套状的改变，血管周围白质明显的脱髓鞘改变。DF各治疗组脱髓鞘改变及炎性细胞浸润较EAE对照组减轻；高、中剂量治疗组较低剂量治疗组减轻，高剂量治疗组病理改变最轻。3．免疫组化结果：(1)纤维蛋白沉积：正常对照组大。鼠脑组织未见到纤维蛋白沉积。而EAE对照组及DF各治疗组大