高效液相色谱法测定红果小檗不同部位小檗碱含量论文

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1、高效液相色谱法测定红果小檗不同部位小檗碱含量论文库尔班江,努尔买买提,罗新泽,海如拉【摘要】目的：建立红果小檗中小檗碱的含量测定方法。方法：高效液相色谱法，采用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂，迪马DiamonsilC18色谱柱(4.6mm×250mm，5μm)；流动相：乙腈0.1%磷酸(50∶50，每100mL加十二烷基磺酸钠0.1g)；检测波长：265nm；柱温：室温；流速：1.0mL/min；进样量：10μL。结果：线性关系:Y=4009.20X+53.735(R=0.9998)，线性范围0.027μg-1.3

2、54μg；回收率：平均回收率为99.43%，RSD=1.12%(n=6)。结论：本法操作简便准确，具有分离度和重现性好、灵敏度高的特点.freelmulariaBge.)系小檗科(Berberidaceae)小檗属(BerberisL.)植物［12］，是主要分布在伊犁河流域一带的药食兼用植物品种之一，具有清热燥湿、泻火解毒、止泻及滋补肝肾等功效，维吾尔医常用于急性胃肠炎、痢疾、咳嗽、肝炎、高血压、消化不良、肾虚滑精及白带等症的治疗［34］。红果小檗的其它同属植物均可列为重要药材，又是提取小檗碱的重要原料［56］

3、。关于红果小檗中化学成分的研究已有文献报道［7］，但在其中有效成分的含量测定方面尚未见报道。笔者采用高效液相色谱法测定了红果小檗不同部位小檗碱的含量，为质量评价提供了依据和方法。1实验材料1.1仪器Agilent1100型高效液相色谱仪，G1311A系列四元梯度泵，G1322A脱气机，手动进样器，G1314AV型电子天平(日本岛津)，SB5200超声清洗器(上海Branson公司)。1.2试药与试剂盐酸小檗碱对照品(批号为110713200208，中国药品生物制品检定所提供)；红果小檗［2006年8月采自伊宁县阿肉

4、斯坦乡，并通过中国科学院新疆分院阿吉教授检定为小檗科(Berberidaceae)小檗属(BerberisL.)植物红果小檗(BerberisnummulariaBge.)］。2实验方法2.1色谱条件色谱柱：十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂，迪马DiamonsilC18色谱柱(4.6mm×250mm，5μm)；流动相：乙腈－0.1%磷酸(50∶50，每100mL加十二烷基磺酸钠0.1g)；检测波长：265nm；柱温：室温；流速：1.0mL/min；进样量：10μL。理论板数按盐酸小檗碱峰计算应不低于4000，见图1，图

5、2。图1盐酸小檗碱对照品HPLC图图2供试品HPLC图2.2对照品溶液的制备精密称取盐酸小檗碱对照品4.23mg，置于25mL量瓶中，加甲醇溶解并稀释至刻度，摇匀。从中精密吸取2mL试液，置于25mL量瓶中，流动相稀释至刻度，制成盐酸小檗碱浓度为13.54μg/mL的对照品标准溶液。2.3线性关系精密吸取上述盐酸小檗碱对照品溶液2μL，6μL，8μL，10μL，20μL，30μL，50μL，100μL进样，按上述色谱条件测定，记录峰面积，以进样进样量为横坐标，主峰峰面积为纵坐标进行线性回归，计算其回归方程为：Y=40

6、09.20X+53.735(r=0.9998)，线性范围为0.027μg-1.354μg，见表1。表1盐酸小檗碱的线性考察结果实验号12345678进样量(μg)0.0270.08120.1080.1350.2710.4060.6771.354峰面积142.403363.948477.063590.1521164.2441728.0702757.9055470.9422.4供试品溶液的制备取试样红果小檗的根、茎、叶及果实粉末各1g，精密称定，分别置于10mL锥形瓶中，加盐酸甲醇(1：100)混合溶液适量，超声30m

7、in，室温放至，用盐酸甲醇(1：100)混合溶液稀释至刻度，摇匀，静置，取上清液用微孔滤膜(0.45μm)滤过，作为供试品溶液。2.5精密度与重复性试验精密吸取对照品溶液(13.54μg/mL)10μL，连续进样5次，测得盐酸小檗碱峰峰面积积分值分别为544.785、565.273、558.285、564.317、549.827，平均值为556.497，RSD=1.32%(n=5)。2.6稳定性试验取同批供试品溶液，分别在0h、3h、6h、12h、24h向色谱仪进样10μL，测得峰面积分别为1238.573、124

8、5.580、1242.535、1248.245、1258.655，平均值为1246.718，RSD=0.43%(n=5)。表明供试品至少在24h内稳定。2.7重现性试验取同一批样品6份，每份约0.1g，按2.4项下方法制备并按上述条件测定，结果盐酸小檗碱平均含量为7.68‰，RSD=1.26%(n=6)。2.8加样回收率试验称取已知含量的取同一