峨眉野连不同部位总生物碱和盐酸小檗碱的含量测定

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1、峨眉野连不同部位总生物碱和盐酸小檗碱的含量测定作者：周嘉裕，廖海，彭书明，陈放【关键词】峨眉野生黄连；,,紫外分光光度法；,,高效液相色谱；,,组织培养　　摘要：目的确定峨眉野连不同器官的总生物碱和小檗碱含量。方法采用紫外分光光度法测定总生物碱含量，高效液相色谱方法测定盐酸小檗碱含量。结果峨眉野连根茎、须根、叶片和叶柄中，均含有生物碱和小檗碱。结论野连地上器官含有较高的总生物碱和小檗碱，对濒危植物的组织培养及保护提供理论指导。　　关键词：峨眉野生黄连；紫外分光光度法；高效液相色谱；组织培养　　DeterminationofTotalAlkaloidandBerberineC

2、ontentsinDifferentOrgansfromCoptisomEiensis　　Abstract：ObjectiveTodeterminethetotalalkaloidandberberinecontentsinrhizome,fibre,laminaandpetioleorgansfromCoptisomEIensis.MethodsThetotalalkaloidandberberinecontentsinedbyUVandHPLCmethodsrespectively.ResultsRhizome,fibre,laminaandpetioleorganso

3、btainalkaloidandberberinecontents.ConclusionTheparativelyhighcontentsintotalalkaloidandberberineintheovergroundorgansofCoptisomeiensismayprovideguidancefortissuecultureandresourceprotection.　　Keyeiensis;UV;HPLC;Tissueculture　　黄连为重要的中药材，味苦性寒，具有清热燥湿、泻火解毒之功效。小檗碱为其主要有效成分。与不同品种和产地黄连比较，峨眉野连Copti

4、someiensisC.Y.Cheng的总生物碱和小檗碱含量较高，药性位居上品［1~3］。由于峨眉野连生态环境较为特殊，加之过度的采挖，致使尚未解决家种栽培问题的野连种群数量急剧减少，已处于濒临灭绝的边缘［4，5］。因此笔者认为开展组织培养和人工培育等技术对峨眉野连进行保护已迫在眉睫。测定黄连不同器官的生物碱含量，对组织培养时有选择地诱导根、茎、叶等器官具有指导意义。本实验利用紫外分光光度法和高效液相色谱（HPLC）方法对峨眉野连的根茎、叶片、须根和叶柄的总生物碱和小檗碱含量进行了分析。结果报道如下。　　1仪器与材料　　illipore超纯水制备器和0.45μm滤膜；SB2

5、200超声波；TU1800紫外可见分光光度（北京普析）；峨眉野生黄连CoptisomeiensisC.Y.Cheng采集于峨眉山，采期为200410中旬~11月上旬，以根茎上节结数推算单株年龄；盐酸小檗碱对照品（中国药品生物制品检定所，批号0732200005）；乙腈为色谱纯；其余试剂均为国产分析纯。　　2方法与结果　　2.1总生物碱的含量测定参照　　2.2.2标准曲线精密称取盐酸小檗碱5mg，置于5ml容量瓶中，加甲醇盐酸（100∶1）溶解至刻度，配制成每毫升含1mg的盐酸小檗碱对照品贮备液，并用甲醇盐酸（100∶1）稀释成不同浓度的系列对照品溶液。用微量注射器吸取10μ

6、l不同浓度的对照品溶液，进行液相色谱分析，测定峰面积值，并以峰面积值A对进样量X（μg）进行线性回归，结果小檗碱的直线回归方程为A=106889＋659877X，r＝0.9991。结果表明，盐酸小檗碱在0.25~2.5μg范围内线性关系良好。　　2.2.3供试品溶液的制备精密称取同株峨眉野连根茎、叶片、须根和叶柄细粉（样品加入液氮，研磨），置入50ml磨口的锥形瓶中，加入甲醇-盐酸20ml，50℃水浴提取120min，超声波处理60min，冷却后，过滤，转移到25ml容量瓶中，加甲醇-盐酸稀释至刻度，备用。高效液相色谱见图1。　　2.2.4精密度实验精密吸取0.03125m

7、g/ml的盐酸小檗碱对照品溶液10μl注入液相色谱仪，测定峰面积，重复5次，小檗碱峰面积的RSD＝1.30%。　　2.2.5稳定性实验取0.05mg/ml的盐酸小檗碱对照品溶液，分别于0，1，2，4h和6h注入液相色谱仪，测定盐酸小檗碱峰面积的RSD＝1.43%。　　2.2.6加样回收率实验精密称取已知含量的野连根茎细粉0.1g，精密加入盐酸小檗碱0.25mg。按3.3方法制备，并按上述色谱条件测定，计算回收率。测得盐酸小檗碱的平均回收率为97.3%，RSD＝2.1%。　　a甲醇盐酸（100∶1）b盐酸小檗碱对照品