高效液相色谱法测定消糖灵胶囊中盐酸小檗碱的含量论文

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1、高效液相色谱法测定消糖灵胶囊中盐酸小檗碱的含量论文【摘要】目的建立用高效液相色谱法测定消糖灵胶囊中盐酸小檗碱的含量。方法采用依利特SinoChromODS-BP柱(4.6mm×200mm，5μm)，以乙腈-磷酸二氢钠溶液(28∶72)为流动相，在345nm波长进行测定。结果盐酸小檗碱在0.08～1.30mg线性关系良好，平均回收率为98.59%，RSD=2.74%(n=5)，重复进样RSD=1.55%(n=5)。结论该方法简便、快捷、准确，灵敏度高.freel处梯度洗脱测定［3］，经过实验发现重复性、稳定性差，故对佐药黄连进行含量测定。黄连主要有效成分中小檗碱含量最高。本实验以盐酸小檗碱

2、为标准物质进行含量测定。1仪器与试药美国惠普HP1100高效液相色谱仪，HP1100色谱工作站；盐酸小檗碱对照品(中国生物制品检定所,.freelODS-BP柱(4.6mm×200mm，5μm)；柱温35℃；流动相为乙腈-磷酸二氢钠溶液(pH=5.0)(28∶72)；流速1.0ml·min-1；检测波长345nm。2.2溶液的制备2.2.1对照品溶液的制备精密称取盐酸小檗碱对照品适量，加甲醇制成每毫升含盐酸小檗碱400μg的溶液，摇匀，即得对照品溶液。2.2.2供试品溶液的制备取本品内容物约5g，研细（过80目筛），精密称取0.5～1.0g,置50ml量瓶中，加盐酸-甲醇（1∶100）4

3、0ml，超声处理30min，加甲醇至刻度，滤过，取续滤液微孔滤膜滤过，作为供试品溶液。2.2.3阴性对照液的制备按处方比例配制缺黄连的阴性对照品，同供试品溶液的制备方法制得阴性对照溶液。2.3系统适用性实验的考察依上述方法，测得盐酸小檗碱对照品、供试品及阴性对照品的色谱图(见图1～3)。结果在该色谱条件下，供试品在对照品色谱保留时间相应处有相同色谱峰，而阴性对照无干扰；样品可得到较好的分离，理论塔板数按盐酸小檗碱峰计算大于3000。2.4线性关系考察精密吸取对照品溶液2，4，6，8，10，20μl依次进样，按测定峰面积，以峰面积积分值为纵坐标，盐酸小檗碱进样量为横坐标，绘制标准曲线，得回

4、归方程Y=3682.4X+15.645,r=0.9998，表明盐酸小檗碱在0.08～0.8mg范围内线性关系良好。2.5精密度实验精密吸取盐酸小檗碱对照品溶液Ⅱ,重复进样5次，50μl/次，依法测定峰面积值，其RSD=0.15%。结果表明，仪器精密度良好。2.6稳定性实验精密吸取同一供试品溶液，分别于0，1，3，5，12h进样5μl，依法测定峰面积值，其RSD=1.20%。结果表明，供试品溶液在12h内稳定。2.7重复性实验精密称取同一批(批号040602)样品5份，按供试品溶液项下制备，每份样品测定2次，计算RSD=1.55%。结果表明，供试品溶液的制备方法重复性良好。2.8加样回收率

5、实验精密称取已知含量(4.85mg·g-1)的样品共5份，分别精密加入对照品适量，依法测定，每份测定两次，计算回收率。结果见表1。表1回收率实验结果（略）表1结果表明，本法平均回收率98.59%，RSD=2.74%，表明本法准确度较好，方法可行。2.9提取方法的考察［6,7］2.9.1方法1取本品适量，研细(过80目筛)，精密称定约1.0g，置50ml容量瓶中，加盐酸-甲醇(1∶100)45ml，60℃水浴中加热15min，取出后超声30min，放置过夜，加甲醇至刻度，摇匀，0.45μm微孔滤膜滤过，取续滤液作为供试品溶液。2.9.2方法2取本品适量，研细(过80目筛)，精密称定约1.0

6、g，置50ml容量瓶中，加盐酸-甲醇(1∶100)45ml，60℃水浴中加热15min，取出后超声60min，加甲醇至刻度，摇匀，0.45μm微孔滤膜滤过，取续滤液作为供试品溶液。2.9.3方法3取本品适量，研细(过80目筛)，精密称定约1.0g，置50ml容量瓶中，加盐酸-甲醇(1∶100)45ml，60℃水浴中加热15min，取出后超声30min，加甲醇至刻度，摇匀，0.45μm微孔滤膜滤过，取续滤液作为供试品溶液。按上述3种方法提取后测定结果相似，考虑到节省时间等因素选择方法3为提取方法，并列入正文。2.10样品含量测定结果取10批样品，依法制备供试品溶液，每批2份，精密吸取供试品

7、溶液20ml，注入液相色谱仪，测定峰面积，计算5批样品的含量。结果见表2。根据表2中10批样品的含量测定结果，考虑到原材料的质量的差异和工艺过程中复杂因素的影响，暂定本品每克含黄连以盐酸小檗碱计不得少于3mg。2.11药材含量测定取黄连药材粉末(过3号筛)0.5g，精密称定，置50ml容量瓶中，加盐酸-甲醇(1∶100)45ml，60℃水浴中加热15min，取出后超声30min，加甲醇至刻度，摇匀，0.45μm微孔滤膜滤过，取续滤液