主动载药法制备苦参碱脂质体的研究论文

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1、主动载药法制备苦参碱脂质体的研究论文【摘要】目的考察脂质体不同制备方法对包封率的影响。方法采用被动载药和主动载药制备脂质体，用微柱离心-紫外分光光度法测定脂质体包封率。结果被动载药法制备脂质体包封率较低，主动载药制备脂质体包封率为84.38%。结论采用硫酸铵梯度法可制得包封率较高的苦参碱脂质体。【关键词】苦参碱；脂质体；主动载药；被动载药Abstract：ObjectiveTostudytheinfluenceofdifferentpreparationmethodsontheentrapmentefficiency.MethodsToprep

2、arematrineliposomesbypassiveloadingmethodandavtiveloadingmethod,theentrapmentefficienciesinedbyminicolumncentrifuge-UVmethod.ResultsTheentrapmentefficiencyethodethod.ConclusionThematrineliposomesmoniumsulphategradienmethod.Keyes;Activeloading;Passiveloading苦参碱是豆科属植物苦参、苦豆子、广豆

3、根等中草药的活性成分，具有抗肿瘤、抗病毒、抗心律失常、抗炎等多种药理作用，尤其抗肝癌活性广泛应用于临床［1］。但现在临床应用的苦参碱制剂存在体内吸收分布广泛、半衰期短、治疗部位药物浓度低、有一定副作用的缺点。将苦参碱制为脂质体，可提高药物的肝靶向性，延长作用时间。脂质体制备很多，可分为被动载药和主动载药两大类。本文优选微柱离心法测定脂质体包封率.freelg/ml，磷酸盐缓冲液pH6.8。2.1.1被动载药乙醚注入法：将磷脂和胆固醇溶于适量乙醚中，电磁搅拌下，用注射针头注入溶有苦参碱的磷酸盐缓冲液中，继续搅拌至挥尽有机溶剂，即得。薄膜分散法：将

4、磷脂和胆固醇溶于适量氯仿中，30℃减压旋转蒸发，除去氯仿成膜，加入溶有苦参碱的磷酸盐缓冲液，恒温摇床振摇20min，搅拌，即得。逆相蒸发法：将磷脂和胆固醇溶于氯仿中，加入溶有苦参碱的磷酸盐缓冲液，油水两相旋摇后置于超声仪中超声10min，直至形成稳定的mol/L的硫酸铵溶液（预热至50℃），旋转蒸发，至50℃水浴中水化1h，超声10min，得空白脂质体。将空白脂质体依次通过0.8，0.65，0.45和0.22μm的微孔滤膜，进行整粒。整粒后脂质体装入透析袋中，置于100倍体积的0.9%NaCl溶液中透析24h，每隔一定时间更换透析液，共3次。取

5、此空白脂质体，加入溶有苦参碱的磷酸盐缓冲液，40℃水浴孵化5min。2.2包封率测定方法建立2.2.1脂质体中药物含量的测定取苦参碱标准品适量，用磷酸盐缓冲液溶解，稀释至一定浓度（1mg/ml），与溴代麝香草酚兰络和显色，于413nm处测定氯仿层吸光度A为0.327。另取磷酸盐缓冲液5份，用HCl调pH分别为7.0，6.0，5.0，3.0，1.0。用上述5种溶液分别配制1mg/ml的苦参碱溶液，将每种溶液分成两份，其中一份加入适量氯仿，摇匀，3000r/min离心10min，取上清液调pH值至7.0并定容，与溴代麝香草酚兰络和显色［4］，于41

6、3nm处测定氯仿层吸光度A（1）；另一份中加入空白脂质体适量，同法测吸光度值A（2），结果见表1和图1。可见，溶液pH值对氯仿萃取回收率影响显著，当pH达到1.0时，回收率接近100%，因此，实验采用先调低pH值，再进行氯仿萃取的方法，可有效分离主药与脂质体膜材，为紫外分光光度法测定苦参碱脂质体中苦参碱含量奠定了基础。表1不同pH值苦参碱回收率比较（略）2.2.2透析法测包封率［5］透析时间的确定：精密吸取苦参碱磷酸盐缓冲液2ml入透析袋中，扎紧上口，至磷酸盐缓冲液20ml中，置于恒温水浴中振荡，每隔1h取样5ml并补充等体积磷酸盐缓冲液，样液

7、以磷酸盐缓冲液为空白，测定吸收度，由结果知9h可达到透析平衡，透析袋内外苦参碱浓度相等。精密吸取空白脂质体2ml入透析袋中，置磷酸盐缓冲液中透析，每1h更换透析液，测吸光度，结果空白脂质体在12h后开始在透析外液中被检出。故确定透析时间为9h。苦参碱脂质体包封率测定：精密吸取苦参碱脂质体2ml入透析袋中，扎紧上口，至磷酸盐缓冲液20ml中透析，每隔1h取样5ml并补充等体积磷酸盐缓冲液，共收集9h透析液，定容，作为供试样品透析液。精密吸取空白脂质体同法操作，以空白脂质体的透析液为参比，测样品透析液的吸光度A外，根据标准曲线计算透过药量C外。另精

8、密吸取苦参碱脂质体2ml，照苦参碱脂质体含量测定方法，测定脂质体中苦参碱总药量C总。包封率＝C总－C外C总2.2.3微柱离心法测包封率［6］凝胶柱的处