主动载药法制备苦参碱脂质体的研究

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1、主动载药法制备苦参碱脂质体的研究【摘要】目的考察脂质体不同制备方法对包封率的影响。方法采用被动载药和主动载药制备脂质体，用微柱离心-紫外分光光度法测定脂质体包封率。结果被动载药法制备脂质体包封率较低，主动载药制备脂质体包封率为84.38%。结论采用硫酸铵梯度法可制得包封率较高的苦参碱脂质体。【关键词】苦参碱；脂质体；主动载药；被动载药　　Abstract：ObjectiveTostudytheinfluenceofdifferentpreparationmethodsontheentrapmentefficiency.Me

2、thodsTopreparematrineliposomesbypassiveloadingmethodandavtiveloadingmethod,theentrapmentefficienciesinedbyminicolumncentrifuge-UVmethod.ResultsTheentrapmentefficiencyethodethod.ConclusionThematrineliposomesmoniumsulphategradienmethod.　　Keyes;Activeloading;Passivel

3、oading苦参碱是豆科属植物苦参、苦豆子、广豆根等中草药的活性成分，具有抗肿瘤、抗病毒、抗心律失常、抗炎等多种药理作用，尤其抗肝癌活性广泛应用于临床［1］。但现在临床应用的苦参碱制剂存在体内吸收分布广泛、半衰期短、治疗部位药物浓度低、有一定副作用的缺点。将苦参碱制为脂质体，可提高药物的肝靶向性，延长作用时间。脂质体制备很多，可分为被动载药和主动载药两大类。本文优选微柱离心法测定脂质体包封率，比较了不同制备方法对其包封率的影响。　　1仪器和试药752紫外光栅分光光度计（上海精密科学仪器有限公司）；RE52型旋转蒸发仪（上

4、海亚荣生化仪器厂）；精密pH计（上海雷磁仪器厂）；SHZ88台式水浴恒温振荡器（江苏太仓实验设备厂）；苦参碱标准品（中国药品生物制品检定所），卵磷脂（中国医药（集团）上海化学试剂公司）；胆固醇（北京奥博星生物技术责任有限公司）；葡聚糖凝胶G50（天津化学试剂二厂）；溴代麝香草酚兰（上海试剂三厂）；其余试剂均为分析纯。　　2方法与结果　　2.1被动载药和主动载药制备脂质体下列制备方法中，磷脂与胆固醇配比为3∶1，药物最终浓度为2mg/ml，磷酸盐缓冲液pH6.8。　　2.1.1被动载药乙醚注入法：将磷脂和胆固醇溶于适量乙

5、醚中，电磁搅拌下，用注射针头注入溶有苦参碱的磷酸盐缓冲液中，继续搅拌至挥尽有机溶剂，即得。薄膜分散法：将磷脂和胆固醇溶于适量氯仿中，30℃减压旋转蒸发，除去氯仿成膜，加入溶有苦参碱的磷酸盐缓冲液，恒温摇床振摇20min，搅拌，即得。逆相蒸发法：将磷脂和胆固醇溶于氯仿中，加入溶有苦参碱的磷酸盐缓冲液，油水两相旋摇后置于超声仪中超声10min，直至形成稳定的mol/L的硫酸铵溶液（预热至50℃），旋转蒸发，至50℃水浴中水化1h，超声10min，得空白脂质体。将空白脂质体依次通过0.8，0.65，0.45和0.22μm的微孔滤

6、膜，进行整粒。整粒后脂质体装入透析袋中，置于100倍体积的0.9%NaCl溶液中透析24h，每隔一定时间更换透析液，共3次。取此空白脂质体，加入溶有苦参碱的磷酸盐缓冲液，40℃水浴孵化5min。　　2.2包封率测定方法建立　　2.2.1脂质体中药物含量的测定取苦参碱标准品适量，用磷酸盐缓冲液溶解，稀释至一定浓度（1mg/ml），与溴代麝香草酚兰络和显色，于413nm处测定氯仿层吸光度A为0.327。另取磷酸盐缓冲液5份，用HCl调pH分别为7.0，6.0，5.0，3.0，1.0。用上述5种溶液分别配制1mg/ml的苦参碱溶

7、液，将每种溶液分成两份，其中一份加入适量氯仿，摇匀，3000r/min离心10min，取上清液调pH值至7.0并定容，与溴代麝香草酚兰络和显色［4］，于413nm处测定氯仿层吸光度A（1）；另一份中加入空白脂质体适量，同法测吸光度值A（2），结果见表1和图1。可见，溶液pH值对氯仿萃取回收率影响显著，当pH达到1.0时，回收率接近100%，因此，实验采用先调低pH值，再进行氯仿萃取的方法，可有效分离主药与脂质体膜材，为紫外分光光度法测定苦参碱脂质体中苦参碱含量奠定了基础。表1不同pH值苦参碱回收率比较（略）　　2.2.2透

8、析法测包封率［5］透析时间的确定：精密吸取苦参碱磷酸盐缓冲液2ml入透析袋中，扎紧上口，至磷酸盐缓冲液20ml中，置于恒温水浴中振荡，每隔1h取样5ml并补充等体积磷酸盐缓冲液，样液以磷酸盐缓冲液为空白，测定吸收度，由结果知9h可达到透析平衡，透析袋内外苦参碱浓度相等。　　精密吸取空白脂质体2ml入透析