rna干扰twist基因对人膀胱癌t24细胞化疗敏感性的影响

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1、RNA干扰Twist基因对人膀胱癌T24细胞化疗敏感性的影响作者：沈彬管旌旌胡敬海王春喜【摘要】目的构建转录因子TRNA及蛋白的表达。使用四甲基偶氮唑蓝法(MTT)及流式细胞术（FCM)测定TRNA和蛋白的表达与其他两组相比明显下调(P＜0.05)；HCPT敏感性与正常对照组相比明显提高(P＜0.05)。结论靶向TRNA和蛋白的表达〔1〕。脂质体转染试剂(Lipofectami2000)购于Invitrogen公司。膀胱癌T24细胞株购自中科院上海细胞研究所细胞库，胎牛血清和IMDM细胞培养基购自天津TBD公司。HCPT针剂由湖北黄石飞云制药有限公司出品。细胞凋亡检测试

2、剂盒购自南京凯基生物科技发展有限公司。1.2实验方法1.2.1Tg/LHCPT，每个浓度设6个复孔;继续培养48h后加入20μl(5g/L)MTT。再培养4h后尽量吸干培养液,加入200μl二甲基亚砜(DMSO)振荡溶解10～15min。上酶联免疫分析仪测每孔吸光度值(A值)，波长490nm，计算HCPT半数抑制浓度(IC50),实验重复3次。抑制率=〔(阴性对照A值-实验组A值)/阴性对照A值〕×100%。以药物浓度数值为横轴,抑制率为纵轴绘制浓度效应曲线。1.2.3流式细胞仪检测各组细胞凋亡情况收集0.1mg/LHCPT处理的不同组膀胱癌细胞,PBS洗涤2次，按照试剂

3、盒说明书依次加入AnnexinV和碘化丙碇(PI)溶液,避光作用15min。上COULTEREPICSXL型流式细胞分析仪检测细胞凋亡,其中每次至少计数10000个细胞,每个样品分别做2次,采用Multicycle分析软件分析。1.3统计学分析采用SPSS11.5统计软件进行统计分析，计量资料以x±s表示，组间比较采用单因素方差分析。2结果2.1MTT法测定T24细胞对HCPT的药物敏感性MTT结果显示随HCPT浓度的增加,正常细胞组、转染阴性对照质粒组和转染Tg/L，与正常细胞组(2.85±0.31)mg/L和转染阴性对照质粒组(2.68±0.38)mg/L相比差异显著

4、(P＜0.05)。2.2流式细胞术检测各组细胞凋亡情况FCM结果显示,各组细胞加0.1mg/LHCPT48h后,正常细胞组的凋亡指数为16.7%±9.6%、转染阴性对照质粒组凋亡指数为21.7%±11.6%，转染T.3讨论近年来膀胱肿瘤的发病率呈逐年增高的趋势，其中浅表型膀胱癌占70%左右。治疗以手术为主，但术后复发率高。RNA干扰技术(RNAi)是近年来出现的一种能高效抑制靶基因mRNA表达的方法。该法是将双链小分子RNA(21～23bp)导入细胞，与细胞内核酸内切酶组装成RNA抑制复合物，此复合物可诱发宿主细胞产生针对这些mRNA的降解反应，阻断这一特定基因的表达链〔

5、1，2〕，从而高效、特异地阻断体内同源基因表达，促使靶mRNA降解，诱使细胞表现出特定基因缺失的表型〔3，4〕。由于RNAi具有高效、低毒、特异性沉默靶基因的特点，故成为近年来研究肿瘤基因治疗的热点。TallinterferingRNAindrugmetabolismandtransport〔J〕.CurrDrugMetab,2007；8(7):7008.4HassanA.PotentialapplicationsofRNAinterferencebasedtherapeuticsinthetreatmentofcardiovasculardisease〔J〕.Rece

6、ntPatent′sCardiovascDrugDiscov,2006；1(2):1419.5RoukosDH.Innovativegenomicbasedmodelforpersonalizedtreatmentofgastriccancer：integratingcurrentstandardsandne.