bfgf对兔骨髓基质细胞vegf因子表达及细胞生物行为的影响

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1、bFGF对兔骨髓基质细胞VEGF因子表达及细胞生物行为的影响作者：常祺刘建胡蕴玉孟国林白建萍彭磊【关键词】血管内皮细胞生长因子　　EffectofbFGFonVEGFexpressionandbiologicalbehaviorofmarroalcells　　【Abstract】AIM:Toinvestigatetheeffectsofbasicfibroblastgroarroalcells.METHODS:Themarroalcellsofthefemurofrabbitsplesultiplication,alkali

2、nephosphataseactivitiesdetection,theputeranalysisofboneclustersandthedetectionofratioofVEGFpositivecells.RESULTS:TheresandtheresultsoftreatmentgroupsulateboththemultiplicationandosteogenicpotentialofmarroalcellsinadosedependentmannerandthebestdoseofbFGFis1200kU

3、539;L-1.　　【Keyarroalcell　　【摘要】目的：观察兔骨髓基质细胞经bFGF刺激后，其VEGF因子表达及细胞生物行为的变化.方法：取兔双侧股骨骨髓基质细胞，采用骨髓基质细胞体外培养技术，分别以不同剂量bFGF刺激细胞，并设立空白对照组.培养5d后，进行细胞形态（HE染色）、增殖情况（细胞记数法与MTT法）、碱性磷酸酶（改良钙钴法染色）、成骨结节（图像分析）、VEGF阳性细胞率（免疫组化染色）等项目的检测.结果：不同剂量组间各项观测指标差异均显著，结果均优于空白对照组.bFGF促进细胞增殖与VEGF表达最佳剂

4、量为1200kU・L1.结论：bFGF能促进骨髓基质细胞增殖，促进VEGF的表达，其剂量与效果间存在明显相关关系.bFGF为1200kU・L-1时，促进骨髓基质细胞表达VEGF及促进细胞增殖作用同时达到最佳效果.　　【关键词】血管内皮细胞生长因子；碱性成纤维细胞生长因子；骨髓基质细胞　　0引言　　组织工程骨的再血管化问题一直阻碍着组织工程技术在骨科领域的发展.血管内皮生长因子（VEGF）是机体内促进血管生长最重要的生长因子，在骨的形成及修复中也起到重要的作用，其表达水平直接影响到以后成骨的血供，影

5、响到成骨的速度和质量［1,2］.骨髓基质细胞是骨组织工程中一种常用的种子细胞，骨髓基质细胞中所包含的许多细胞，如内皮细胞、成纤维细胞、巨嗜细胞等都可分泌表达VEGF.如何刺激骨髓基质细胞，促进VEGF的分泌则成为增加VEGF表达的另一重要手段.我们采用不同剂量bFGF刺激体外培养的兔骨髓基质细胞，观察其VEGF因子表达改变，并参照细胞生物行为的变化，为临床应用提供实验依据.　　1材料和方法　　1.1材料幼兔1a公司，bFGF试剂购自双鹭公司，VEGFmAb及SP试剂盒购自迈新公司.骨髓基质细胞原代培养：取幼兔杀死，在无菌条件

6、下取出双侧股骨和肱骨，去除骨外膜，DMEM液冲洗3次，用注射器反复冲洗骨髓腔，冲出的骨髓细胞接种于装有适量培养液（DMEM培养基，含100mL・L-1胎牛血清）的培养瓶中，置于50mL・L-1CO2培养箱中37℃恒温培养，24h后吸出悬浮细胞，用DMEM液冲洗后，留下贴壁细胞继续培养.而后隔日换液，观察细胞生长情况.细胞融合成片，长满培养瓶底部后，用2.5g・L-1胰蛋白酶消化，传代培养.　　1.2方法将bFGF试剂溶解于DMEM中，针头滤器过滤除菌.第4代细胞传代后，分别用含bFG

7、F0，200，400，600，800，1000，1200和1600kU・L-1的血清培养液培养，同时分组.取第4代骨髓基质细胞，以消化法传代后，按以上分组方法加入不同剂量bFGF达到预期浓度，调整细胞密度至1×107L-1，接种于50mL培养瓶.置于37℃、饱和湿度、50mL・L-1CO2培养箱内培养.隔日换液.每4～6h在倒置显微镜下观察细胞形态.另取第4代细胞，传代后调整细胞密度至1×107L-1，接种于50mL培养瓶（瓶中预先置入盖玻片），培养4d后，取出盖玻片，PBS冲洗3次，750mL&

8、#12539;L-1乙醇固定，行HE染色(Fig1).取第4代骨髓基质细胞，以消化法传代后，按以上分组方法加入不同剂量bFGF，调整细胞密度至1×107L-1，接种于24孔培养板内，放置于培养箱内，隔日换液.细胞培养5d后以胰蛋白酶消化，用细胞记数板记数细胞，每孔重复3次，取均值.细胞培养