人基质细胞衍生因子1对骨髓间充质干细胞增殖的影响论文

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1、人基质细胞衍生因子1对骨髓间充质干细胞增殖的影响论文孔霞,唐俊明,郭凌郧,杨建业,陈龙,黄永章,王家宁【摘要】目的：探索人基质细胞衍生因子1（SDF1）对间充质干细胞（MSC）增殖的影响.方法：采用经典的全骨髓贴壁法培养MSC,通过成骨、成脂肪等多向诱导分化以及流式细胞仪分析其表面标记（CD133，CD34，CD90，CD105）等鉴定MSC特征；以P3MSC为实验材料，采用H3TdR参入法分析SDF1对MSC增殖的影响.以50nmol/L渥曼青霉素，10mmol/LLY294002，50mmol/LPD98059

2、，0.1g/LAMD3100等分别处理P3MSC,观察SDF1影响MSC增殖的信号机制.结果：培养的MSC呈现出CXCR4.freelg/LSDF1的20mL/L促进了MSC增殖，而含有100mg/LSDF1的150mL/LFBS抑制了MSC增殖.SDF1抑制MSC增殖的效应与其使MSC停滞在G1/S期有关.促分裂原活化蛋白激酶P38MAPK阻断剂SB203580和CXCR4阻断剂AMD3100取消了SDF1抑制MSC增殖的效应，而细胞外信号调节激酶阻断剂PD98059加强了SDF1抑制MSC增殖的效应.结论：S

3、DF1/CXCR4介导的抑制MSC增殖的效应与促分裂原活化蛋白激酶和细胞外信号调节激酶等信号分子有关.【关键词】人基质细胞源衍生因子1;间充质干细胞;增殖;促分裂原活化蛋白激酶【Abstract】AIM:Toexploretheeffectofstromalcellderivedfactor1alpha(SDF-1α)onmesenchymalstemcell(MSC)proliferation.METHODS:MSCcultureedarroethod;MSCultidifferentiationandsurfac

4、emarkerassay(CXCR4,CD133,CD34,CD90,CD105);AfterMSCsg/LSDF1a,.freelol/Lannin,10mmol/LLY294002,50mmol/LPD98059and0.1g/LAMD3100inhibitors,theproliferationrateseasuredby［3H］thymidineincorporationassay.RESULTS:CulturedMSCshadtheabilityofmultidifferentiationandhighlyex

5、pressedCXCR4,CD105andCD90.20mL/LFBSincluding100mg/LSDF1apromotedMSCproliferation,hoL/LFBSincluding100mg/LSDF1acouldinducemarkedinhibitionofMSCproliferationthroughthearrestintheG1/Scheckpoint.AnditsinhibitoryeffectonMSCproliferationitogenactivatedproteinkinase（MAP

6、K）inhibitorSB203580andCXCR4inhibitorAMD3100.Hoesenchymalstemcell;proliferation;MAPK0引言骨髓来源的间充质干细胞（bonemarroesenchymalstemcell,MSC）在一定条件下可以分化为心肌、成骨、软骨、脂肪、胰岛、肌腱等多种类型的细胞［1］.在心肌内、静脉内、冠脉内等不同途径移植MSC或粒系集落刺激因子动员骨髓发现其可以迁移到心肌梗死部位，通过参与血管新生、心肌再生等改善修复受损的心脏［1］.有研究［2］发现，SDF1/CXCR

7、4轴不仅调控造血干细胞（hematopoieticstemcell，HSC）的迁移，而且也影响HSC的增殖和分化.新近研究发现MSC表达CXCR4［3］，显示SDF1/CXCR4轴可介导MSC的迁移［4］.但是就SDF1/CXCR4轴是否影响MSC的增殖分化，目前仍不清楚.我们利用H3TdR参入法检测SDF1α对MSC增殖的影响，并初步探索SDF1α影响MSC增殖的信号机制.1材料和方法1.1材料SPF级EM培养基（美国Gibcol公司）；胎牛血清（fetalbovineserum，FBS，杭州四季青生物工程有限公司

8、）；胰酶（美国Sangon公司）；CO2细胞培养箱（美国科学仪器公司）；倒置荧光显微镜(日本Nikon公司)；恒低温切片机(德国Leica公司)；图像分析系统（美国MediaCyberics公司）；hSDF1α（美国upstate公司）；CD105,CD90,CD133和C