氢醌对体外培养骨髓基质细胞核转录因子表达的影响

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1、氢醌对体外培养骨髓基质细胞核转录因子表达的影响作者：杨海玉，杨建国，王光汉，俞康【摘要】　　为了研究氢醌(hydroquinone，HQ)对细胞激活剂佛波酯（PMA）导致的骨髓基质细胞（BMSC）核转录因子表达的影响，并初步探讨其与苯的血液学毒性的关系。用体外培养法获得骨髓基质细胞，观察其形态学变化；分别用NF-κBP65免疫组织化学方法和TransAMP65试剂盒测定了用不同浓度的氢醌加激活剂PMA刺激后的骨髓基质细胞NF-κB蛋白表达和活性的动态变化。结果表明：各组细胞加入HQ后，与对照组相比，P65蛋白由细胞核转回至胞核

2、周围的细胞浆，染色呈弱阳性；不同浓度的HQ作用不同时间后NF-κB活性测定结果与对照组间具有明显差异；各组之间相比，100μmol/L的HQ作用72小时对NF-κB的抑制作用最明显；而0.1μmol/L的HQ几乎无抑制作用。结论：HQ可抑制体外培养骨髓基质细胞核转录因子的激活，并且随HQ浓度和作用时间而增强，推测可能与苯的造血微环境毒性有关。【关键词】基质细胞;体外培养;氢醌;核转录因子　　HydroquinoneInhibitsNF-κBExpressioninHumanBoneMarroalCellsInVitro　　Ab

3、stractThisstudyedtoinvestigateyristateacetate(PMA)，andtoexploretherelationshipbetechanismandthehematologytoxicityofbenzenetentatively.Thehumanbonemarroalcells(BMSC)orphologythoseBMSCeasuredmunohistochemistryandTransAMP65kit.Theresultsshocellnucleustocytoplasmaaround

4、cellnucleusanditsconcentrationlomunohistochemistry.AndTransAMP65kitassayrevealedthatHQeffectsatdifferentconcentrationse.Thedetectedparametersin100μmol/LHQgroupcontrolgroupafterexposurefor72hours.Buttheparametersatdifferenttimeinμmol/LHQgroupe.　　Keyalcell;cultureinvi

5、tro;hydroquinone;NF-κB苯是一种应用广泛的溶剂和化工原料［1-5］，目前还不能停止它的使用；但另一方面，苯也是一种主要的环境污染物和毒物。苯对血液系统的影响主要表现为抑制骨髓的造血功能，导致血液系统病变，抑制基质细胞的生长，并通过干扰骨髓基质细胞分泌造血生长因子的能力，抑制骨髓的造血功能，导致血液系统病变，如贫血、再生障碍性贫血、骨髓增生异常综合症（MDS）、白血病等。到目前为止，苯诱发再生障碍性贫血等疾病的机制仍不完全明确，但可以肯定的是苯主要通过其代谢产物氢醌、苯醌等发挥毒性作用。本研究观察氢醌诱导体外

6、培养骨髓基质细胞NF-κB活性、蛋白表达的动态变化，旨在探讨NF-κB的表达抑制在苯对造血微环境损害中的作用，从而为进一步研究苯相关再生障碍性贫血与造血微环境的关系，为再生障碍性贫血的发病机理的查明、预防和治疗提供实验依据。　　材料和方法　　标本　　骨髓液取自来医院体检中心就诊的成人志愿者（年龄20-45岁）的骨髓，要求骨髓常规检查无数量及形态学改变。肝素抗凝（肝素100U/ml），加入等量含20%胎牛血清的RMPI1640培养液充分混合成细胞悬液。　　骨髓基质细胞培养［6］　　将上述细胞悬液反复抽吸吹打制成单细胞悬液后，10

7、00r/min离心20分钟，用IMDM重新悬浮细胞，种于30ml的塑料培养瓶中，置于饱和湿度、5%CO2、37℃培养箱中培养，5天后开始换液，以后每隔3-4天更换培养液1次。待细胞铺满培养皿底面后，用含有0.25%的胰酶作消化液进行传代培养。用流式细胞仪计数各生长阶段细胞，绘制生长曲线。　　细胞形态学观察　　利用倒置相差显微镜对细胞生长和形态变化特点进行动态观察，并照相。　　加入氢醌和佛波酯　　培养细胞计数，转移至6孔培养板中，调整每孔细胞密度为1.0×105/ml。氢醌被溶解在D-Hanks液中，然后加入到其中A-C孔细胞中

8、，最终达到3个浓度10、1和0.1μmol/L，D孔加入等量缓冲液作阴性对照，E孔加入NF-κB特异性抑制剂吡咯烷二硫代氨基甲酸盐(pyrrolidinedithiocarbamate，PDTC)作阳性对照，接着立即加入佛波酯于5孔中，另选4孔用于免疫组织化学检测，预先在培养