氢醌对人骨髓单个核细胞topo ⅱα表达的影响及其可能机制

《氢醌对人骨髓单个核细胞topo ⅱα表达的影响及其可能机制》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在应用文档-天天文库。

1、氢醌对人骨髓单个核细胞TOPOⅡα表达的影响及其可能机制：施益芬，俞康，陈怡，任行洲，毕来喜，钱红兰【摘要】目的?：观察苯代谢物氢醌(hydroquinone，HQ)对人骨髓单个核细胞拓扑异构酶Ⅱα(TOPOⅡα)表达的影响，探讨TOPOⅡα在HQ所致造血毒性中的作用及其调控机制。方法：50μmol/LHQ培养10h的正常人骨髓单个核细胞设为实验组，等体积灭菌蒸馏水培养10h为对照组。ethods:Humanbonemarroononuclearcellsol/LHQfor10h?(usedthecells

2、RNAandproteinethod，respectively.TheChromatinImmunoprecipitation?(ChIP)?assayechanismofTOPOⅡαexpres-sionchanges.Results:?TheproteinandmRNAexpressionofTOPOⅡαaftertreatedethylation?(P<0.01)andheightenedlevelofH3K9methylationofTOPOⅡαpromoter?(P?<0.05)?th

3、anthatinthecontrolanbonemarroononuclearcells.Thechangesofhistonechemicalmodificationplaydefiniteimportantroleinthebenezen’shematopoietictoxicity.　　Keyerase?Ⅱα;histoneacetylation;histonemethylation;Chromatinimmunoprecipitation(ChIP)　　苯是明确的职业致癌物之一。苯诱发的造血系统疾病

4、发病率高。尽管苯所致造血毒性已得到广泛重视，但其毒性机制仍未阐明。近年来，拓扑异构酶在苯致造血毒性中的作用日益受到关注[1-2]。氢醌(hydroquinone，HQ)是苯在体内的主要代谢产物之一，因此，利用HQ研究苯造血毒性机制，探讨拓扑异构酶IIα(TOPO?IIα)在HQ所致造血毒性中的作用及其调控机制具有十分重要的意义。　　1??材料和方法　　1.1??研究对象??正常志愿者捐献的骨髓20份。志愿者年龄20～35岁，平均27岁，其中男11例，女9例。本研究已通过温州医学院附属第一医院伦理委员会的认证

5、。所有骨髓捐献者均签署知情同意书。　　1.2??实验材料??TOPO?IIα检测试剂盒、兔抗人TOPO?IIα抗体(美国TopoGen公司)，SuperECLPlusI-1640培养液。37℃、5%CO2饱和湿度条件下培养。　　1.3.2??实验分组：培养板各孔均加入2×1640液2mL、胎牛血清液0.4mL、灭菌双蒸水1.48mL、分离制备的骨髓单个核细胞4×106。实验组加入用灭菌双蒸水稀释60倍后的终浓度为50μmol/L的HQ溶液120μL，对照组加入等量的灭菌双蒸水(设立平行样，各实验组及对照组的

6、标本为同一)。培养10h后，等渗PBS液洗2遍，调整细胞浓度为1×106/mL备用。　　1.3.3??核蛋白的提取：收集骨髓单个核细胞(3×107～5×107)(注：因细胞需要量大，标本为多个同组标本收集后混合)，加入1mL冰冷的bufferA(10mmol/LHepes，pH7.9，10mmol/LKCl，0.1mmol/LEDTA，0.1mmol/LEGTA，0.5mmol/LPMSF)，冰上裂解15min，加入62.5μL质量分数为20%NP-40，剧烈震荡15s，10?000r/min离心30s，核

7、沉淀重悬于50μL冰冷的bufferB(20mMHepes，pH7.9，0.4MNaCl，1mmol/LEDTA，1mmol/LEGTA，1mmol/LPMSF)，剧烈震荡15min，4℃15?000r/min离心5min，上清液即核蛋白提取液，-70℃保存。　　1.3.4??1200型读胶仪读取扩增条带的光密度值进行分析，以目标基因与β2微球蛋白扩增产物的光密度值的比值计算表达水平，实验重复3次。　　1.4??统计学处理方法??采用t检验。　　2??结果　　2.1??HQ对骨髓单个核细胞TOPO?IIα含

8、量的影响??HQ处理后，TOPO?IIα含量较对照组明显降低，差异有显著性(P<0.01)，见图1、表1。　　2.2??HQ对骨髓单个核细胞TOPO?IIαmRNA水平的影响??氢醌处理后，TOPO?IIαmRNA水平较对照组明显下降，差异有显著性(P<0.01)，见图2、表1。　　2.3??HQ对骨髓单个核细胞TOPO?IIα启动子组蛋白乙酰化、甲基化水平的影响??HQ处理后，与乙酰化组蛋白H4、甲