维生素e抑制3t3l1前脂肪细胞的分化

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1、维生素E抑制3T3L1前脂肪细胞的分化【关键词】维生素E；碘；3T3L1；增殖；分化；肥胖；MTT；油红O染色法［ABSTRACT］Objective:TostudytheeffectsofvitaminEonproliferationanddifferentiationof3T3L1preadipocyte.Methods:TheeffectofvitaminEontheproliferationof3T3L1inedbyMTT.OilredOstaininginethedifferentiationrateandlevelof3

2、T3L1preadipocytes.Results:VitaminEinhibitedthedifferentiationofpreadipocytesat10μmol/Land100μmol/L.Conclusions:VitaminEcouldinhibitthedifferentiationof3T3L1preadipocyte.［KEYTT;Oilredstaining维生素E除了具有抑制多元不饱和脂肪酸及磷脂质被氧化，保护细胞膜的抗氧化作用外，还具有许多非抗氧化的功能。我们以往的实验中发现维生素E对营养性肥胖小鼠具有降低体重的

3、作用［1，2］，为了进一步研究其作用机制，本实验利用3T3L1前脂肪细胞研究维生素E对前脂肪细胞增殖和分化的影响。1材料与方法1.1材料DMEM培养基和HEPES购于Gibco公司，胎牛血清购于杭州四季青公司，1甲基3异丁基黄嘌呤（1methyl3isobuthylxanthine，IBMX）、地塞米松（dexamethasone，DEX）、胰岛素（insulin）、油红O（Oilred）、噻唑蓝（MTT）、维生素E均购于Sigma公司。1.2方法1.2.1细胞培养3T3L1前脂肪细胞用含10%胎牛血清的DMEM高糖培养基，在

4、5%CO2、37℃培养箱中生长，根据细胞状况每2天换一次培养液。3T3L1前脂肪细胞融合达70%时，胰蛋白酶消化、传代。1.2.2细胞增殖实验将3T3L1前脂肪细胞以5×103的密度接种于96孔板，分为4组，培养基中维生素E终浓度分别为0、1、10和100μmol/L（对照组及1、10、100μmol/L维生素E组），每组6孔。培养72h后用MTT比色法以波长490nm测定各孔吸光度（OD）值。1.2.3细胞分化实验实验分为对照组及1、10、100μmol/L维生素E组，每组6孔。配制诱导培养液为DMEM培养基＋0.5mmol/L的IB

5、MX＋1.0μmol/LDEX+5mg/L的胰岛素，配制分化培养液为DMEM培养基＋0.5mmol/L的IBMX＋1.0μmol/LDEX。4组诱导和分化培养液中的维生素E终浓度分别为0、1、10、100μmol/L。将3T3L1前脂肪细胞5×103的密度接种于96孔板。细胞完全融合后2d（此时为诱导分化的第0天），换为诱导培养液，在第48小时（第2天）后换为分化培养液，第4天及以后的换液不加任何诱导分化剂，第8天细胞用10%的甲醛固定1h后，用油红O工作液（2mg/mL）染色2h，弃去油红O，用双蒸水充分洗干净，培养板放入37℃温箱使残

6、余水分蒸发掉，用异丙醇溶解细胞内的油红O，在510nm波长测吸光度。1.3统计学处理　数据用±s表示，采用SPSS12.0统计软件进行单因素方差分析，与对照组比较采用Duntt检验，P<0.05为差异有统计学意义。组别nOD490对照组60.696±0.0581μmol/L维生素E组60.668±0.067*10μmol/L维生素E组60.689±0.031*100μmol/L维生素E组60.630±0.095*注：与对照组相比，*P<0.05。2.2维生素E对3T3L1前脂肪细胞分化的影响1μmol/L维生素E对前脂肪细胞分

7、化没有影响，而在10～100μmol/L时可抑制前脂肪细胞的分化（图1、2，表2）。10μmol/L组、100μmol/L组细胞脂肪含量分别为对照组的57%、34%。图1维生素E对3T3L1前脂肪细胞分化的影响注：A为对照组维生素E前脂肪细胞油红O染色；B为10μmol/L组维生素E前脂肪细胞油红O染色；C为100μmol/L组维生素E前脂肪细胞油红O染色图2维生素E对3T3L1前脂肪细胞分化的影响（×300）表2维生素E对3T3L1前脂肪细胞分化的影响（±s）组别nOD510对照组60.452±0.0111μmol/L维生素E组60

8、.413±0.01010μmol/L维生素E组60.259±0.081*100μmol/L维生素E组60.153±0.016*注：与对照组相比，*P<0.05。3讨论当前，