142例儿童急性白血病的流式分析

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1、142例儿童急性白血病的流式分析刘俊闪刘炜王国锋（河南省郑州市儿童医院血液科河南郑州450003）【摘要】目的探讨四色流式细胞术检测儿童急性白血病免疫表型的意义。方法应用流式细胞仪分析、形态学、细胞化学染色相结合的方法对142例儿童急性白血病进行诊断。结果142例儿童急性白血病中AML39例，占27.5%，ALL103例，占73%,ALL中B-ALL90例，占63.4%,T-ALL13例，占9.1%。AML,B-ALL,T-ALL分别有不同抗原的高表达，且存在部分AML表达淋系抗原，某些ALL表达髓系抗原

2、。结论四色流式细胞术对儿童急性白血病的准确诊断有重要意义。【关键词】儿童急性白血病流式分析【中图分类号】R733.7【文献标识码】A【文章编号】1672-50S5（2013）38-0113-02白血病（AL）是一组高度异质性的造血系统恶性肿瘤，血细胞形态学及细胞组织化学染色一直是白血病诊断与分型的基石，随着免疫学技术的不断发展,在此基础上加上免疫分型，诊断率可从70%左右提高到90%以上，我们总结了142例儿童急性白血病的形态学及免疫分型特点，报告如下。1资料与方法1.1病例选择2011年8月-2013年

3、6月我院收治的AL患者共142例，其中男性63例，女性79例，年龄4月-14岁，平均年龄39.3月。分类按照法国、美国、英国三国协作组（FAB分型）［1］方案分型，其中急性髓系白血病（AML）39例，急性淋巴细胞白血病（ALL）103例。1.2细胞化学染色方法骨髓涂片进行瑞吉氏染色，镜下分类500个细胞，细胞化学染色钮括过氧化物酶染色、糖原染色、α-乙酸萘酚酯酶染色，按FAB标准进行白血病分型。1.3免疫分型试剂及方法1.3.1仪器与试剂仪器为美国BD公司FACScalibur型流式细胞仪。单

4、抗包括CD2、CD3、CD4、CD5、CD7、CD8、CD10、CD13、CD14、CD15、CD19、CD20、CD22、CD33、CD34、CD38、CD64、CD117、HLA-DR、MPO、cCD79a、cCD3、cCD22,TdTo流式细胞仪及所冇单抗均购自Becton-Dickson公司。1.3.2荧光标记染色方法每个病例在治疗前抽取肝素抗凝骨髓或外周血3ML,取BD专用流式细胞仪专用试管，每管中加入4种荧光标记抗体（FITC/PE/PerCP/APC）和标本，并吋设定阴性对照管，混匀后避光1

5、5min,然后加入IX溶血素，混匀避光10min,离心450g,5min,弃上清，加PBS混匀，再离心450g，5min,弃上清加PBS混匀，上机检测。1.3.3流式细胞仪检测测定前以标准校正荧光微球校正仪器，应用CellQuest软件设置获取条件，每测定管获取分析30000个细胞。用CD45/SSC双参数建立二维点图，根据细胞CD45抗原表达及SSC将不同细胞分群，然后对各群细胞设门，分析所圈定的白血病细胞群的表面标记。以表面抗原阳性率≥20%为阳性判断［2］。2结果2.1形态学分布2年内收治的1

6、42例儿童急性白血病中AML38例，其中M0型3例，Ml型2例，M2型11例，M3型5例，M4型7例，M5型10例；ALL100例，其中L1型46例，L2型34例，L3型20例；形态学不能准确归类的白血病的4例。2.2免疫分型142例AL中急性髓细胞系白血病（AML）39例，急性淋巴细胞白血病（ALL）103例。133例形态学+组织化学诊断与流式细胞免疫分型符合，符合率为93.7%。形态学诊断为AML-M0中有2例经流式细胞检测分别诊断为B-ALL（1例)、T-ALL(1例)。而形态学诊断为ALL中有3例

7、经流式细胞检测分别确诊为MO(1例)、M5(l例｝、1717(1例)，形态学不能准确分类的4例流式细胞仪最后分别为B-ALL(3例)、M7(l例)。39例髓系AML中CD33表达率最高为89.7%(35/39),同吋或分别表达髓系标志抗原CD64,CD13,CD117,CD15,MP0，分别为79.5%(31/39)、69.2%(27/39)、69.2%(27/39),59.0%(23/39),48.7%(19/39)。其中15例AML伴随有淋系抗原CD7(7/39),CD56(6/39),CD19(2/

8、39)。103例ALL中，B-ALL为63.4%(90/142)，主要表达CD19、cCD79a,cCD22,HLA-DR、CD10,分别为100%(90/90)、100%(90/90)、100%(90/90)、98.9%(89/90)、91.1%(82/90)。T-ALL为9.1%(13/142)，主要表达cCD3,CD7、CD5、CD2,分别为100%(13/13100%(13/13),92.3%(12/13),76.9%