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时间:2018-11-10
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1、峨眉山粗老茶中茶多糖的含量测定【关键词】峨眉山粗老茶茶多糖提取 茶多糖(Teapo1ysaccharides,简称TPS)是茶叶中一类与蛋白质结合在一起的酸性多糖或酸性糖蛋白。近年来文献报道,茶多糖具有降血糖、降血压、耐缺氧及增加冠状动脉血流量、增强机体免疫功能、抗癌、抗氧化等多方面的生物学功能。峨眉山以其独特的自然资源优势,丰富的茶叶资源著称。据报道[1],茶叶越粗老,多糖含量越高。目前市场上粗老茶(茶树修剪下的枝叶,茶叶加工过程中的枝叶和灰末等副产品,品质较劣的茶叶)利用率较低,若从其中提取茶
2、多糖则可变废为宝,能为中低档茶叶的综合利用开辟一条新途径。 1材料与仪器 1.1材料粗老茶(购自峨眉山市售散装等外茶叶或采于峨眉山报国寺周边的茶树老叶)。 1.2试剂实验中所用化学试剂均为分析纯。 1.3蒽酮-硫酸试液配制方法将0.6671g蒽酮溶于200ml浓硫酸,置于棕色瓶中冷藏备用。 1.4仪器TU1901双光束紫外可见分光光度计(北京普析通用仪器有限公司);KQ2200DB型数控超声波清洗器(昆山市超声仪器有限公司)。 2方法与结果 2.1含量测定 2.1.1茶叶多糖的提取与
3、精制称取40目干燥茶叶粉末20g,置索氏提取器中,100ml石油醚(沸程60~90℃)90℃水浴回流脱脂1h,过滤,挥干溶剂,200ml80%乙醇90℃水浴回流1h,重复2次。双层滤布过滤,滤渣加400ml蒸馏水,沸水浴回流提取1h,间歇搅拌,重复1次,合并两次滤液,离心分离(4000r·min-1,10min),真空浓缩(50℃,0.09MPa)至20ml。Sevage法除蛋白。加入4倍量无水乙醇,4℃过夜醇沉,离心分离,沉淀依次用无水乙醇、丙酮、乙醚各洗两次,红外干燥(60℃),即得精制茶多糖。
4、称重得精制茶多糖0.9447g,得率为4.72%。 2.1.2标准曲线的绘制称取无水葡萄糖对照品适量,加蒸馏水配成1.0008mg·ml-1的标准溶液。精密移取对照品溶液1,2,4,6,8,10ml,分别置100ml容量瓶,各加水至刻度,摇匀。分别精密移取上述标准溶液各2.0ml,置具塞试管中,以2ml蒸馏水作空白,每管再加8ml蒽酮-硫酸试液,立即摇匀,冰水浴冷却。沸水浴中加热7min,流动水冷却至室温,10min后在575nm处测定吸光度,以吸光度(A)对葡萄糖浓度(C)作回归处理,得回归方程
5、:C=105.03833A-7.24989,r=0.9995,线性范围:10.008~100.08μg·ml-1。 f=g),C为精制茶多糖贮备液中葡萄糖浓度(mg·ml-1),D为多糖的稀释因素。测出换算因子f=12.1。 2.1.4样品含量测定样品溶液的制备:精确称取40目茶粉1g,加80%乙醇40ml,95℃水浴回流1h,趁热抽滤,滤渣用80%热乙醇洗涤(10ml×2)。挥干溶剂后,滤渣连同滤纸置于烧瓶中,加100ml蒸馏水,100℃水浴浸提1h,趁热抽滤,滤渣用热蒸馏水洗涤(10ml×2
6、),合并滤液,离心分离(4000r·min-1,10min),上清液置于100ml容量瓶中,以蒸馏水定容至刻度,摇匀。精确称取上述样品溶液1ml,置于100ml容量瓶中,加蒸馏水溶解并稀释至刻度,90℃水浴加热,超声1min增溶,摇匀,制得茶多糖样品液,蒽酮-硫酸分光光度法法测定其吸光度(A),由回归方程计算试液中葡萄糖浓度(C),按下式计算样品中茶多糖平均含量为4.23%,RSD=2.12%(n=5)。 多糖含量(%)=C×D×f/g·ml-1),D为多糖的稀释因素,f为换算因子,l于具塞试管中
7、,按照“2.1.2“项下方法处理,每间隔1h测定吸光度,RSD=0.23%(n=5),显色在5h内稳定。 加样回收率:精确称取3份40目茶树老叶粉各1g,加入精制茶叶多糖约20mg,按“重复性”项下方法测定茶叶多糖含量,计算回收率。结果见表1。 表1加样回收率测定结果(略) 3讨论 文献报道,采用苯酚-硫酸法和蒽酮-硫酸分光光度法测定多糖的含量均能得到理想的结果[2],但在实验中发现,苯酚-硫酸分光光度法不稳定,容易造成测定误差,故用蒽酮-硫酸分光光度法。蒽酮-硫酸分光光度法测定茶多糖时,用
8、0.05%的蒽酮-硫酸,蒽酮-硫酸与茶多糖体积比4∶1,100℃反应5min,575nm测定吸光值,用葡萄糖作标准,可提高茶多糖测定的准确度。 陈建国等[3]报道不同茶叶样品中,茶多糖含量有很大的差异,其含量在1.29%~4.53%之间。峨眉山粗老茶中茶多糖平均含量为4.23%,含量较高,具有进一步的研究开发价值。【参考文献】 [1]谢明勇,聂少平.茶叶多糖的研究进展[J].食品与生物技术学报,2006,25(2):107. [2]杨辉.蒽酮-硫酸比色法测定玉竹
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