大鼠脊髓渐进性压迫减压后神经细胞黏附分子的表达

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1、大鼠脊髓渐进性压迫减压后神经细胞黏附分子的表达作者：毋崇岭，孙正义，汪玉良，史迎宾，陈文华【摘要】目的：研究大鼠脊髓渐进性压迫减压后修复过程中神经细胞黏附分子(NCAM)的表达情况.方法：在脊髓灰质神经元中的表达，并采用计算机Mias软件进行图像分析.结果：各组灰度值：空白对照组：245.53±3.47；损伤组减压后1d组：235.33±6.48；3d组：218.86±2.67；5d组：198.39±3.24；7d组：173.15±5.98；14d组：190.45±4.93；28d组：227.68±2.85.与空白对照组相比脊髓渐进性损伤组各不同时间点组均有NCAM的表达,差异具有统

2、计学意义(P<0.01)，其中以减压后7dNCAM的表达量最高.结论:在脊髓渐进性压迫减压后的修复过程中NCAM均有表达，NCAM表达量的变化可能与脊髓损伤后的修复有关.【关键词】神经细胞黏附分子；脊髓损伤　　0引言　　脊髓损伤（spinalcordinjury,SCI）是一种严重的继发于高能量创伤的中枢神经系统疾患，其病理改变包括轴突的断裂、髓鞘的崩解以及神经细胞的坏死和凋亡［1］.造成损伤的原因有外伤性和非外伤性.外伤性损伤是受到机械外力作用包括直接或间接的外力作用而造成脊髓结构与功能的损害，为急性损伤；而非外伤性的损害则多为肿瘤、结核、椎管畸形等原因所造成，为慢性损伤［2

3、］.慢性脊髓损伤在致病因素去除后其神经功能可以获得一定程度的恢复，神经系统本身具有一定的自我恢复能力［3］.近年来有关人脊髓损伤的研究受到关注.神经细胞黏附分子（neuralcelladhesionmolecule,NCAM）是细胞表面的一种糖蛋白，在神经系统发育过程中与轴突生长延伸，突触结构的维持，模式重建以及神经元的出芽有着密切关系，是中枢神经系统功能修复的标志物［4］.我们采用免疫组织化学SABC法对脊髓渐进性压迫损伤修复过程中NCAM的表达进行了研究，为从分子水平阐明NCAM与慢性压迫性脊髓损伤后神经修复的机制，为寻找有效的治疗方法提供新的思路.　　1材料和方法　　1.1材料

4、健康清洁级成年ias图像分析软件（四川大学图像图形研究所研制）；光学显微镜及配套数码相机（XS402型，南京江南光电股份有限公司）；切片机(KD2508型(浙江省金华市科迪仪器设备有限公司)；兔抗大鼠NCAM抗体，即用型SABC试剂盒，DAB显色剂（购自武汉博士德生物工程有限公司）；抗原修复液，0.1mol/L磷酸盐缓冲液（pH=7.4），40g/L多聚甲醛，0.1mol/L磷酸盐缓冲液（pH=7.4），0.5mol/L水合氯醛，30mL/L过氧化氢（自行配制）.　　1.2方法　　1.2.1模型制备随机取大鼠3只作为空白对照组，剩余48只为损伤组.空白对照组大鼠不做任何处理，常规

5、饲养.损伤组大鼠用0.5mol/L水合氯醛腹腔注射麻醉，俯卧位固定，背部剃毛，常规碘酒酒精消毒，以T10棘突为中心，正中切开皮肤及皮下组织（切口长约1.5cm），分离椎旁肌肉，显露椎板及棘突，咬除T10棘突，保留脊突根部.用不朽钢螺钉（直径为0.25cm,螺距为0.5mm）在脊突根部中点凿孔直至显露硬脊膜，再安装同样大小的塑料螺钉，逐层缝合.操作过程中注意不损伤脊髓.24h后检查下肢功能未受损伤，随后每7d背部切开5mm小口，显露并缓慢旋进螺钉1次，每次旋进1/8圈制作大鼠脊髓后路渐进性压迫模型.压迫至中度后（CR=40％，CR指压迫物占椎管矢状径的百分比）减压.损伤组大鼠减压后按不

6、同时间点又分为：1，3，5，7，14和28d6个组每组动物8只.　　1.2.2神经功能评分损伤组大鼠处死前行改良的Tarlov评分、斜板试验.对大鼠进行行为及肢体运动功能检测，观察伤后各时间点大鼠后肢的活动、肌力等功能恢复情况.评分标准：I改良的Tarlov评分：0分：后肢无自主运动；1分：后肢有自主运动，但无法站立，仅限于髋、膝关节的非反射性运动；2分：能站立但无法行走，仅限于肢体髋、膝、踝3个主要关节的运动；3分：能行走，但有中度强直，能主动支持体质量和不协调步态，或偶尔出现协调步态；4分：能行走，轻度强直或有共济失调，前肢和后肢协调的步态，行走时有趾间关节的运动；5分：正常步态

7、.Ⅱ斜板实验：采用Rivlin法.固定长方形木制斜板，将大鼠身体纵轴与斜板纵轴平行、头朝斜板抬高侧放置，测定大鼠能停留5s的最大斜板倾斜角度，每只动物测5次，取其平均值作为测定值.　　1.2.3组织取材在不同时间点用0.5mol/L水合氯醛腹腔注射麻醉大鼠，仰卧位固定，胸腹部剃毛，常规碘酒、酒精消毒，铺无菌巾，取前正中切口，打开胸腔，于主动脉根部置一根医用4号缝线，剪开左心室置管入主动脉升部，用丝线结扎固定，剪开右心耳，用0.1mol/L磷酸盐缓冲液（pH