大鼠脊髓渐进性压迫减压后神经细胞黏附分子的表达论文

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1、大鼠脊髓渐进性压迫减压后神经细胞黏附分子的表达论文毋崇岭，孙正义，汪玉良，史迎宾，陈文华【摘要】目的：研究大鼠脊髓渐进性压迫减压后修复过程中神经细胞黏附分子(NCAM)的表达情况.方法：）是细胞表面的一种糖蛋白，在神经系统发育过程中与轴突生长延伸，突触结构的维持，模式重建以及神经元的出芽有着密切关系，是中枢神经系统功能修复的标志物［4］.我们采用免疫组织化学SABC法对脊髓渐进性压迫损伤修复过程中NCAM的表达进行了研究，为从分子水平阐明NCAM与慢性压迫性脊髓损伤后神经修复的机制，为寻找有效的治疗方法提供新的思路.1材料和方法1.1材料健康清洁级成年ias图像分析软件（四川大学图像图形研究

2、所研制）；光学显微镜及配套数码相机（XS402型，南京江南光电股份有限公司）；切片机(KD2508型(浙江省金华市科迪仪器设备有限公司)；兔抗大鼠NCAM抗体，即用型SABC试剂盒，DAB显色剂（购自武汉博士德生物工程有限公司）；抗原修复液，0.1mol/L磷酸盐缓冲液（pH=7.4），40g/L多聚甲醛，0.1mol/L磷酸盐缓冲液（pH=7.4），0.5mol/L水合氯醛，30mL/L过氧化氢（自行配制）.1.2方法1.2.1模型制备随机取大鼠3只作为空白对照组，剩余48只为损伤组.空白对照组大鼠不做任何处理，常规饲养.损伤组大鼠用0.5mol/L水合氯醛腹腔注射麻醉，俯卧位固定，背

3、部剃毛，常规碘酒酒精消毒，以T10棘突为中心，正中切开皮肤及皮下组织（切口长约1.5cm），分离椎旁肌肉，显露椎板及棘突，咬除T10棘突，保留脊突根部.用不朽钢螺钉（直径为0.25cm,螺距为0.5mm）在脊突根部中点凿孔直至显露硬脊膜，再安装同样大小的塑料螺钉，逐层缝合.操作过程中注意不损伤脊髓.24h后检查下肢功能未受损伤，随后每7d背部切开5mm小口，显露并缓慢旋进螺钉1次，每次旋进1/8圈制作大鼠脊髓后路渐进性压迫模型.压迫至中度后（CR=40％，CR指压迫物占椎管矢状径的百分比）减压.损伤组大鼠减压后按不同时间点又分为：1，3，5，7，14和28d6个组每组动物8只.1.2.2神经

4、功能评分损伤组大鼠处死前行改良的Tarlov评分、斜板试验.对大鼠进行行为及肢体运动功能检测，观察伤后各时间点大鼠后肢的活动、肌力等功能恢复情况.评分标准：I改良的Tarlov评分：0分：后肢无自主运动；1分：后肢有自主运动，但无法站立，仅限于髋、膝关节的非反射性运动；2分：能站立但无法行走，仅限于肢体髋、膝、踝3个主要关节的运动；3分：能行走，但有中度强直，能主动支持体质量和不协调步态，或偶尔出现协调步态；4分：能行走，轻度强直或有共济失调，前肢和后肢协调的步态，行走时有趾间关节的运动；5分：正常步态.Ⅱ斜板实验：采用Rivlin法.固定长方形木制斜板，将大鼠身体纵轴与斜板纵轴平行、头朝斜

5、板抬高侧放置，测定大鼠能停留5s的最大斜板倾斜角度，每只动物测5次，取其平均值作为测定值.1.2.3组织取材在不同时间点用0.5mol/L水合氯醛腹腔注射麻醉大鼠，仰卧位固定，胸腹部剃毛，常规碘酒、酒精消毒，铺无菌巾，取前正中切口，打开胸腔，于主动脉根部置一根医用4号缝线，剪开左心室置管入主动脉升部，用丝线结扎固定，剪开右心耳，用0.1mol/L磷酸盐缓冲液（pH=7.4）快速灌洗至组织变白，然后用40g/L多聚甲醛，0.1mol/L磷酸盐缓冲液（pH=7.4）500mL灌注固定.0.5h后取自损伤边缘至远、近端各5mm两段脊髓组织；空白对照组大鼠则择时取相应节段脊髓.标本取出后随即用40g

6、/L多聚甲醛固定后石蜡包埋，切片（厚度5μm），以备免疫组织化学染色.1.2.4免疫组织化学采用SABC法，按其试剂盒说明书步骤进行.显微镜下观察，照相.1.2.5图像分析NCAM染色以神经元细胞及其突起呈棕黄色为阳性，采用Mias图像分析软件测量各组脊髓灰质NCAM的表达量.物镜放大10倍视野下，随机选择视野中阳性反应细胞并测定其灰度值，灰度值与细胞反应强度成反比，每次取5个视野，以其平均值作为测定值.统计学处理：计量数据均以x±s表示，应用SPSS12.0统计软件分析，不同时间点损伤组间比较采用方差分析，组间方差不齐的采用非参数Kruskal表达空白对照组脊髓灰质中NCAM的表达极少，

7、损伤组各不同时间点组在脊髓灰质前后角表达量明显增加.与空白对照组（245.54±3.47）比较，减压后1d组（235.33±6.48）；3d组（218.86±2.67）；5d组（198.39±3.24）；7d组（173.15±5.98）；14d组（190.45±4.93）和28d组（227.68±2.85），各组NCAM表达量均增加，差异有统计学意义(P0.01).提示脊髓渐进性压迫损伤后NCAM大量表达（图