na+睭+交换体1反义基因磁性纳米微粒对sgc7901胃癌

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1、Na+睭+交换体1反义基因磁性纳米微粒对SGC7901胃癌毕业：刘海峰陈刚滕小春汪兴伟【摘要】目的探讨Na+睭+交换体1(Na+睭+exchanger1,NHE1)反义基因磁性纳米微粒对SGC7901胃癌细胞形态学的影响。方法构建NHE1反义基因真核表达载体和NHE1反义基因磁性纳米微粒，将NHE1反义基因转染至SGC7901胃癌细胞中，从光镜、电镜水平观察转染与未转染细胞形态学的变化。结果氧化铁磁性纳米颗粒成功地将NHE1反义基因转染至SGC7901胃癌细胞中。与亲本细胞相比，光镜下NHE1反义基因转染的SGC

2、7901胃癌细胞胞体增大，胞质丰富，核大小相对1致，核质比和核分裂象减少，异型性减少。透射电镜下细胞线粒体数量增多、体积增大，并可见髓鞘样变，粗面内质网、高尔基体较发达，内质网扩张，核偏向1侧，极性增强。结论NHE1反义基因磁性纳米微粒能使SGC7901胃癌细胞发生形态学及超微结构的变化，有促进SGC7901胃癌细胞分化的作用。【关键词】Na+睭+交换体1；磁性纳米微粒；反义基因治疗；胃肿瘤【Abstract】ObjectiveTostudytheeffectsofNa+睭+exchanger1(NHE1)ant

3、isensegenemagicnanoparticiesonthemorphologyofSCG7901gastriccanercells.MethodsAntisenseNHE1eukaryoticexpressiononvectorpcDNA3.1acellsbyDCIONP.Thedextrancoatedironoxidenanoparticles(DCIONP)agicnanoparticlesinedthemorphologicalchangesofthetransfectedanduntransfe

4、ctedcellsunderlightandelectronmicroscopes.ResultsDCIONPsuccessfullytransfectedNHE1antisensegeneintoSGC7901gastriccancercells.Underthelightmicroscope,andparativelysamesizeofnuclei,andtheratioofnucleitocytoplasm,mitoticcountandheteromorphismdecreasedicroscopesh

5、oberofmitochondrionandsizeofthetransfectedSGC7901gastriccancercellsicreticulumandendoplasmicreticulumandstrengthenedheteropolarity.ConclusionThemorphologyandmicrostructureofSGC7901gastriccarcinomacellschangeafterthetransfectionofantisenseNHE1genethatcanpromot

6、ethedifferentiationofSGC7901gastriccarcinomacells.【KeyRNA及其蛋白在胃癌中的表达程度显著高于胃癌前病变，NHE1基因可能是治疗胃癌的1个理想靶点［1］。为探讨纳米技术体内靶向基因治疗胃癌的可行性，我们前期成功构建了同时具有生物功能、磁性靶向功能和基因治疗功能的NHE1反义基因磁性纳米微粒。本研究使用NHE1反义基因磁性纳米微粒体外转染SGC7901胃癌细胞，观察基因转染对胃癌细胞形态学的影响。1材料与方法1.1材料人NHE1cDNA的PEAP克隆载体由Jos

7、sete.Noel博士(MontreatyUniversity，Canada)惠赠；真核表达载体pcDNA3.1(-)/Zeo、Zeocin为Invitrogen公司产品；绿色荧光蛋白报告基因pEGFP睳3质粒为Cloech公司产品；PCR分子量标准物、小牛血清、胰酶、EDTA均为华美生物公司产品；转染用脂质体DOTAP为Roche公司产品；质粒提取试剂盒为Promega公司产品。1640培养基、低糖DMEM培养基购自GIBCO生物公司；葡聚糖T10与多聚赖氨酸均购自Sigma公司；超滤离心管Centriplus

8、YM10购自华美公司；其他试剂均为国产分析纯。1.2方法1.2.1NHE1反义基因真核表达质粒的构建及鉴定：参照文献［2］。1.2.2氧化铁磁性纳米颗粒(DCIONP)和NHE1反义基因磁性纳米微粒的构建及鉴定：参照文献［3］。1.2.3细胞培养：SGC7901胃癌细胞在10%小牛血清、100mg/L链霉素、100U/ml的RPMI1640培养基中，培养条件为37℃、5%