3o4磁性纳米微粒细胞相容性的实验研究'-fe3o4磁性纳米微粒细

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1、304磁性纳米微粒细胞相容性的实验研究今Fe3O4磁性纳米微粒细胞相容性的实验研究摘要：目的：研究F3O4磁性纳米微粒的细胞相容性。方法：制备顺磁F304纳米颗粒，加至体外培养的人鼻咽癌细胞及人滑膜细胞中，研究磁性纳米材料的细胞相容性。结果：与对照组相比，F3O4磁性纳米微粒对两种细胞的生长繁殖无明显的影响。结论：制备的F3O4磁性纳米微粒与人体细胞具有较好的生物相容性。关键词：磁性纳米颗粒；细胞相容性；实验中图分类号：Q6-3文献标志码：A文章编号:1008-240903-0026-04磁性纳米颗粒作为磁控纳米载药系统的载体，载药后具有缓释药物、延长药物作用时间，使药物

2、具有靶向性，使药物能浓集于靶器官而降低用药量，避免或减轻毒副作用等优点。磁性纳米颗粒已成为周内外物理材料科学与生物医学技术的前沿研究热点。但目前用于载药的磁性纳米微球种类不多，制备工艺复杂，用于与载体结合的药物种类的研究不多，且仅用于实验研究，使用范极其有限。F3O4磁性纳米粒子由于其优良的磁性和易加工性，特别是超顺磁性，在生物、医疗等各个方面都得到了广泛应用，本实验研究用简便的方法制备Fe304磁性纳米微粒，研究其生物相容性，为其下一步的载药及临床应用打下实验基础。1材料与方法1.1药品与试剂F3O4/石墨烯磁性纳米颗粒；MTT液；二甲基亚砚、RPMI-1640及DME

3、M培养基均购自GBICO公司；小牛血清、胰蛋白酶；其他常用试剂均购自Sigma公司。1.2细胞株人鼻咽癌CNE-2细胞株。人滑膜细胞1.3仪器CO2培养箱，倒置显微镜，SW-CJ-IF型超净工作台；ComingCostar细胞瓶及培养板，其他细胞培养常用仪器均为国产。1.4方法1.4.1磁性纳米四氧化三铁核心的制备参照文献利用共沉淀方法制备F3O4：按摩尔比为1：2准确称取FeO和F3O4,总质量为3g,移入圆底烧瓶中，溶解于无氧水中并通人氮气，然后向其中滴加1mol/L氨水，体系中不断有黑色沉淀物生成。反应结束后体系pH值为13,用无氧水洗涤沉淀物3次，直至pH值为7〜

4、8,制得的F3O4冷冻干燥，备用。将镁条在干冰中点燃，即获得石墨烯粗品。将获得的石墨烯粗品使用稀盐酸溶解后，充分除去未反应的镁，随后使用去离子水清洗直至呈中性，超声分散30mine静置3d后，取上清液保存，即得石墨烯溶液。将50ml环己烷、10mlTritonX-100以及8ml正己醇混合均匀，加入600）11水以及400（11上述石墨烯水溶液及四氧化三铁，搅拌300min形成油包水的微乳液。随后在搅拌下加入500）11正硅酸乙酯，反应24h。在8000rpm离心5min分离，弃去上清液，下层产物分别用乙醇和水洗3次，60°C真空干燥，即获的Fe3O4/石墨烯/SiO2纳

5、米颗粒。置透射电子显微镜下观察颗粒直径及分散状况。1.4.2细胞实验按常规方法复苏冻存的人鼻咽癌细胞CNE-2o收集对数生长期细胞，调整细胞浓度为1x105个/ml,铺于96孔培养板中，每孔加入200小细胞培养液，共5组，每组设10个复孔，空白孔用Hanks液或PBS液补充。在5%CO2,37°C下培养24h,至细胞单层达孔底80%,小心去除培养液，向每组孔中分别加磁性纳米微球溶液10M，培养液190

6、ilo对照组只加入200

7、ilDMEM培养液，在5%CO2,37°C继续培养，培养期间定期用倒置显微镜观察细胞形态变化。72h后弃去培养液，再每孔加入20pilMTT溶液，

8、继续培养4h。终止培养，吸去孔内MTT液。每孔加入150pl二甲基亚砚DMSO,轻轻振荡几次，使结晶物充分溶解。在酶联免疫检测仪570nm处测量各孔的吸光度值。实验设复孔,重复1次。人滑膜细胞培养及实验方法与人鼻咽癌细胞CNE-2相同。2结果2.1形态学观察培养24h后，在倒置显微镜下观察两种细胞：CNE2细胞中，对照组及磁性纳米微球组细胞生长良好，细胞间排列紧密，无漂浮细胞。见图1。培养48h后。在倒置显微镜下观察，对照组及磁性纳米微球组细胞均生长正常，细胞间排列紧密，无漂浮细胞。见图2。人滑膜细胞中情况与CNE2细胞相似。见图3。2.2MTT法检测检测结果见表1,表2

9、。从MTT检测结果来看，设置的磁性纳米颗粒组，与空白对照组数据相近，数值无明显差异。进行统计学分析，说明在培养系统中加入Fe3O4/石墨烯纳米颗粒，对两种细胞的生长没有明显的影响，说明Fc3O4/石墨烯纳米颗粒与两种细胞均具有较好的生物相容性。3讨论随着新型药剂学的逐步成熟，药物制剂在理论、工艺及研究等方面进入了一个全新的阶段，缓控释制剂和靶向制剂已经成为研究的热点。Fe3O4磁性纳米微粒以其小尺寸效应、良好的靶向性、生物降解性和功能基团等优点，成为一类非常重要的无机磁性功能材料，由于其突出的磁响应性和超顺磁性在诸多领域显示出