谈首乌方对lid 大鼠纹状体细胞外液dopac、hva、5

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1、谈首乌方对LID大鼠纹状体细胞外液DOPAC、HVA、5左旋多巴诱发的异动症(levodopa-induceddyskinesia，LID)是治疗帕金森病(Parkinsonsdiseases，PD)药物左旋多巴(L-DOPA)长期治疗过程中普遍出现的并发症，临床可表现为舞蹈样动作、肌张力障碍等，随着疾病的加重和治疗时间的延长，LID的程度加重，发生率升高，增加了临床治疗的复杂性，对患者的生活质量产生不良影响，因此限制了L-DOPA的长期临床应用。　　目前关于LID的病理生理机制尚不清楚，已经明确的是PD的严重程度是LID的发病基础、外源性L-DOPA的波动性刺激是LID发生的始动因

2、素。外源性L-DOPA进入机体后，在芳香族氨基酸脱羧酶的作用下转化为多巴胺(DA)，后者在儿茶酚-氧位-甲基转移酶(T)、单胺氧化酶(MAO)的作用下不断代谢，产生二羟基苯乙酸(DOPAC)和高香草酸(HVA)。5-羟吲哚乙酸(5-HIAA)是5-羟色胺(5-HT)的最终代谢产物，常用来反映快速代谢的5-HT的变化。由于5-HT与外源性L-DOPA引起的脑内DA的增多有密切关系，因此本实验通过建立LID大鼠模型，进行行为学评价，并应用脑内微透析技术进行纹状体细胞外液的动态取样，检测L-DOPA给药后LID大鼠脑内病变靶器官细胞外液DOPAC和HVA及5-HIAA的实时动态变化，评价中

3、药首乌方(Sadopar，每片0.25g，含L-DOPA200mg与苄丝肼50mg)为上海罗氏公司产品。水杨酸钠、6-羟基多巴胺(6-OHDA)、辛烷磺酸钠、3，4-二羟基苯乙酸(DOPAC)、高香草酸(HVA)，5-羟吲哚乙酸(5-HIAA)购自Sigma公司，乙腈、乙酸、磷酸和甲醇为Fisher公司产品。乙二胺四乙酸二钠、氯化钾、磷酸二氢钠为国药集团化学试剂有限公司产品。阿朴吗啡购自中国食品药品检定研究所，产品批号100839。SA/12脑部探针(透析膜长4mm)及探针套管、CMA/402微量泵、CMA/470低温样品自动收集器，清醒动物活动装置(瑞典CMA公司)。手术使用设备:

4、大鼠脑立体定位仪STRONG8003、动物体温维持仪269001、颅钻/90-102(深圳瑞沃德生命科技有限公司)。高效液相色谱检测系统(德国SykamS-2100)。　　2实验方法　　2.1动物　　分组、给药及微透析过程6-OHDA脑内注射制作PD大鼠模型:大鼠腹腔注射10%水合氯醛(3.5mL/kg)麻醉后，黑质致密部和中脑腹侧被盖部注射6-OHDA生理盐水(含维C)8μL/位点(2μg/μL)。假手术组(Sham组)注射等量生理盐水。21天后腹腔注射0.5mg/kg阿朴吗啡，记录1h内大鼠向健侧旋转圈数，大于100圈/h即为PD模型制作成功。对PD大鼠再次分组

5、并给药，每组7只。异动症模型组(LID)给予多巴丝肼30mg/kg/d，其中含L-DOPA24mg/kg/d，S)评分。计算每次AIM评分的总和。实验期间共评价4次。最后一次行为学评价后大鼠腹腔注射10%水合氯醛麻醉，纹状体内(A:+0.2mm，L:+3mm，V:7.5mm)埋入探针套管。次日在大鼠清醒自由活动状态下插入脑探针，生理盐水平衡1h后换为5mmol/L水杨酸钠林格液以2μL/min的速度灌流，每30min收集1管。取前3管测定计算均值作为基础水平(0min)，然后再灌胃一次药物或纯净水，继续收集样品至给药240min。探针在使用前测定体外回收率，以折算透析液中各种待

6、测物质的浓度。　　2.2检测　　大鼠纹状体细胞外液DOPAC，HVA和5-HIAA浓度按照本实验室已经建立的高效液相色谱-电化学(HPLC-ED)法方法测定大鼠纹状体细胞外液中DOPAC，HVA，5-HIAA浓度。C18分析柱(Sykam，2.1100mm，3μm)。AntecDecadeⅡSDC电化学检测器。流动相:乙二胺四乙酸二钠(0.027mmol/L)、辛烷磺酸钠(0.74mmol/L)、氯化钾(2mmol/L)、磷酸二氢钠(100mmol/L)、甲醇(15%)、乙睛(1%)、乙酸(0.05%)。流速0.2mL/min，进样量20μL。柱温:30℃。　　2.3数据

7、处理　　计量资料以均数±标准差(珋x±s)表示，采用SPSSforhanes检验。P<0.05认为有统计学意义。　　3结果　　3.1动物行为学结果Sham组大鼠在全部评价过程中没有出现异常运动，评分为0;LID组大鼠出现了明显的异常不自主运动，如躯干和颈部向健侧扭转，严重时不能保持躯体平衡而摔倒;健侧上肢不自主抖动;快速的对侧旋转等，如图1所示。给予S评分降低，SAO及T代谢形成DOPAC和HVA。动态观察Sham组DOP