加味宫外孕ⅱ号方对早孕大鼠滋养细胞的影响

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1、加味宫外孕Ⅱ号方对早孕大鼠滋养细胞的影响摘要：目的探讨中药加味宫外孕Ⅱ号方对早孕大鼠滋养细胞的影响，进一步探索中药的杀胚作用和作用机理。方法将55只造模成功的早孕大鼠随机分为6组：西药组、中西药结合组和中药低、中、高剂量组、空白组，分别予以连续给药7d（西药组肌注甲氨蝶呤，中西药结合组肌注甲氨蝶呤和加味宫外孕Ⅱ号方中剂量中药灌胃，中药低、中、高剂量组分别予加味宫外孕Ⅱ号方低、中、高剂量灌胃，空白组予生理盐水灌胃），第8d处死大鼠，取出子宫及孕囊行光镜及电镜检测。结果用药后各组与空白组比较，滋养细胞组织形态及超微结构均有不同程度的病理学改变，中药低、中剂量组及西药组

2、滋养细胞排列紊乱，有炎性细胞浸润，胚囊正常形态被破坏，线粒体肿胀；高剂量组及结合组滋养细胞及胚囊正常形态完全消失，无或少量坏死组织残留，线粒体出现空泡化。结论加味宫外孕Ⅱ号方可能通过改变滋养细胞的组织形态及超微结构，影响滋养细胞的数量、形态、分泌、合成等生理代谢功能，从而起到杀胚作用，其中变化表现最明显的是中药高剂量组，说明随着中药浓度的增大，滋养细胞破坏更明显。关键词：加味宫外孕Ⅱ号方；早孕大鼠；滋养细胞6目前在临床上异位妊娠的保守治疗主要以中西医结合治疗为主，西药杀胚的机理明确，而关于活血消�杀胚中药的机理研究则很少见，其机理尚不明确。目前未找到有关异位妊娠动

3、物模型的建立方法，由于异位妊娠早期与早期宫内妊娠相似，因此，我们以早孕大鼠作实验模型，通过观察加味宫外孕Ⅱ号方对早孕大鼠滋养细胞组织形态及超微结构的影响的实验研究，进一步探索中药的杀胚作用和作用机理，间接为中医药保守治疗异位妊娠提供新的理论依据。1资料与方法1.1一般资料SD大鼠共110只，雄性30只，体重（280±10）g，雌性80只，体重（250±10）g，由重庆第三军医大学医学实验动物中心提供，实验动物许可证号：SCXK（渝）2012-0005。1.2仪器OLMPUS光学显微镜，日立H-600型透射电镜，包埋机，石蜡切片机，脱水机，摊片机，烤片机（美国LEI

4、CA）。1.3药物加味宫外孕Ⅱ号方：丹参15g，桃仁9g，赤芍15g，莪术9g，三棱9g，全蝎10g，地鳖虫10g，蜈蚣9g，紫草25g，由贵阳中医学院第一附属医院中药制剂室通过水煎、过滤、浓缩制成每毫升含生药6g、3g、1.5g三种不同剂量（即：高剂量、中剂量、低剂量）的药液；分装密封，于4度冰箱保存备用；甲氨喋呤5mg/支6（山西普德药业有限公司生产）。1.4方法1.4.1动物造模造模方法参照徐叔云《药理实验方法学》[1]：将动情期雌鼠共69只与雄鼠按1∶1比例合笼过夜，次晨将发现阴栓或行阴道涂片发现精子者定为妊娠的第1d。为避免假孕大鼠对实验准确性产生影响，

5、参照文献[2]后本实验在第5d起连续对交配成功的大鼠行阴道脱落细胞检查，共检查3d，剔除交配成功而未受孕的大鼠14只。1.4.2分组及给药将造模成功的55只孕鼠随机分为6组：西药组、中西药结合组和中药低、中、高剂量组、空白组。西药组在妊娠第1d一次性肌注甲氨蝶呤7.775mg/Kg体重，一次为一疗程，同时予生理盐水7.77mL/Kg体重灌胃1次/d；中西药结合组于妊娠第1d起予加味宫外孕Ⅱ号方煎剂按7.77mL/Kg体重（每毫升含生药3g）灌胃1次/d，同时在妊娠第1d一次性肌注甲氨蝶呤7.775mL/Kg体重；中药高、中、低剂量组分别在妊娠第1d予相应剂量的加味

6、宫外孕Ⅱ号方煎剂按7.77mL/Kg体重灌胃，1次/d，空白组予等量生理盐水灌胃；各组均连续灌胃7d。1.4.3标本制备及检测用药后第7日晚8点起禁食水，于12h后处死大鼠，剖腹取出大鼠子宫及孕囊，平均分成两份，一份浸入4%多聚甲醛液中固定24h，再进行常规石蜡包埋、切片、HE染色，行光镜下观察。另一份切取16mm2大小组织块用2.5%的戊二醛液固定，置于4℃冰箱内固定24h，再按照电镜常规标本制作，于透射电镜下观察滋养细胞的超微结构。2结果2.1光镜检测空白组滋养细胞发育良好，细胞间隙紧密、排列整齐、体积大、扁平，胚囊完整；西药组滋养细胞间隙不清、排列紊乱，大量

7、炎性细胞浸润，胚囊正常形态破坏；中西药结合组滋养细胞及胚囊正常形态完全消失，无或少量坏死组织残留；中药中剂量组滋养细胞间隙增大、排列紊乱，炎性细胞浸润，胚囊正常形态被破坏；低剂量组滋养细胞间隙增大、排列紊乱、少量炎性细胞浸润，胚囊正常形态破坏；高剂量组滋养细胞及胚囊正常形态完全消失，大量炎症细胞浸润，无或少量坏死组织残留，见图1。2.2电镜检测空白组可见到清晰的核膜及核仁，均匀的染色质（常染色质）散布于核质内；西药组细胞核呈椭圆形，异染色质边集，线粒体肿胀；结合组细胞与细胞的间隙明显增宽，细胞核的核浆致密，内含边集，呈团块状的异染色质，线粒体出现空泡化；中药中剂量

8、组细胞核形