助孕3号方对肾虚黄体不健流产大鼠tcrγδt细胞的影响论文

《助孕3号方对肾虚黄体不健流产大鼠tcrγδt细胞的影响论文》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在学术论文-天天文库。

1、助孕3号方对肾虚黄体不健流产大鼠TCRγδT细胞的影响论文【摘要】观察补肾健脾中药助孕3号方对肾虚黄体不健流产大鼠T淋巴细胞抗原识别受体（TCRγδT)的影响。【方法】将SD大鼠40只随机分为5组，即空白对照组，模型组，助孕3号方高、低剂量组（中药高、低剂量组，剂量分别为7.08、3.54g·kg-1·d-1），多力玛组（剂量为1.5mg·kg-1·d-1)；除空白对照组外，其他组均采用羟基脲（剂量为450mg·kg-1)联合米非司酮（剂量为3.75mg·kg-1）复制肾虚黄体不健流产模型。观察各组大鼠的子宫质量、胚胎数及流产情况，采用流式细胞仪检测外

2、周血TCRγδT及CD3+T淋巴细胞水平。【结果】模型组大鼠子宫质量、孕胎数显著性降低.freelajorhistopatibilityplex，MHC）Ⅰ类抗原的受体。研究认为［1］TCRγδT细胞在识别胚胎抗原中起关键作用，并决定与胚胎抗原反应的质量，从而影响妊娠结局。本研究拟以羟基脲复制肾虚黄体不健大鼠流产模型，观察助孕3号方对TCRγδT细胞的影响，以探讨该方的保胎机制，现报道如下。1材料与方法1.1动物雄性10～12周龄SPF级SD大鼠，雌性8～10周龄SPF级SD大鼠，体质量约200～250g。购自广州中医药大学实验动物中心，合格证号为N

3、O.0009247。1.2药物、试剂与仪器羟基脲为北京红惠生物制药股份有限公司产品，批号：20013389；多力玛（5mg烯丙雌醇/片）为匈牙利吉瑞大药厂产品，批号：20020213；米非司酮为上海华联制药有限公司生产，批号：H10950347。助孕3号方由菟丝子、桑寄生、续断、黄芪、党参、女贞子等组成，提取工艺流程（由珠江医院提取加工）为药材洗净，第1次加10倍量水浸泡30min，提取2h，滤过；第2次加8倍量水提取2h，滤过，合并2次滤液，真空浓缩，真空度为0.08～0.085mPa；浓缩至1.5倍药材体积时，高速离心，转速1500r/min；上清

4、液浓缩至比重为1.18；喷雾干燥，参数为温度180℃，出风温度90℃，流量500mL/min；最后得膏8.5kg，得膏率为8.5/32.76=25.9%。大鼠每种药物的用量根据大鼠用药人鼠换算公式计算而得。溶血素、藻红蛋白（phycoerythrin，PE）抗γδTCR单克隆抗体、异硫氰酸荧光素(fluoresceinisothiocyanate，FITC)抗CD3单克隆抗体均购自深圳晶美生物工程有限公司。ALTRA流式细胞仪为美国BECKMANCOULTER公司产品。1.3分组、造模［2］、给药及观察指标将SD大鼠雌雄合笼，每日晨阴道涂片，以发现大量

5、精子者作为妊娠第1天。将雌性受孕大鼠随机分为5组，每组8只。除空白对照组外，其他组均于妊娠第1至第7天以羟基脲灌胃（450mg·kg-1·d-1），第7天时灌服米非司酮（3.75mg·kg-1），复制肾虚黄体不健流产模型。造模同时，助孕3号方高、低剂量组（中药高、低剂量组）分别以7.08、3.54g·kg-1·d-1的剂量灌胃给药，多力玛组以1.5mg·kg－1·d－1的剂量灌胃给药，模型组与空白对照组灌服等容积生理盐水，均连续7d。灌服米非司酮24h后，以乙醚麻醉，眼眶后静脉丛取血，用乙二胺四乙酸二钠盐（EDTA）抗凝管取500μL新鲜全血，1h内采

6、用流式细胞仪检测TCRγδT细胞水平。1.4TCRγδT水平检测EDTA抗凝的新鲜大鼠外周全血50μL，分别加入10μLFITC抗CD3单克隆抗体、PE抗γδTCR单克隆抗体，混匀，避光孵育20min；加入1倍流式细胞检测剂2mL混匀，室温避光孵育10min，直至液体澄清透明；1000r/min离心5min，弃上清；将细胞悬浮于0.5mL磷酸盐缓冲溶液（PBS）中，振荡混匀后上机检测。在流式细胞仪上，以氩离子激光波长488nm为激发光，以FSC/SSC二维散点图设门于淋巴细胞群体进行检测，用ExPo32采集分析软件对数据进行分析。1.5统计处理采用SP

7、SS11.0统计学分析软件进行数据处理。2结果2.1各组大鼠一般情况、子宫质量、胚胎数及流产情况除空白对照组外，各组妊娠大鼠灌服羟基脲后都有不同程度的毛松、毛干枯、弓背、蜷卧、活动力下降、纳食减少等症状，各组大鼠大便未见明显异常。表1结果表明，模型组大鼠子宫质量、孕胎数显著性降低，流产率显著性升高（P＜0.01）；中药高、低剂量组均可升高子宫质量及孕胎数，降低流产率，与模型组比较有显著性差异（均P＜0.05或P＜0.01），且呈现一定的剂量效应关系，其作用与孕激素多力玛相似。2.2各组大鼠TCRγδT细胞、CD3＋T淋巴细胞表达情况比较见表2、图1。表

8、2结果表明，模型组大鼠外周血中CD3+T细胞水平显著性升高，提示体内细胞免疫过度，从而对妊娠带