助孕3号方对肾虚黄体不健流产大鼠tcrγδt细胞的影响

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1、助孕3号方对肾虚黄体不健流产大鼠TCRγδT细胞的影响【摘要】观察补肾健脾中药助孕3号方对肾虚黄体不健流产大鼠T淋巴细胞抗原识别受体（TCRγδT)的影响。【方法】将SD大鼠40只随机分为5组，即空白对照组，模型组，助孕3号方高、低剂量组（中药高、低剂量组，剂量分别为7.08、3.54g·kg-1·d-1），多力玛组（剂量为1.5mg·kg-1·d-1)；除空白对照组外，其他组均采用羟基脲（剂量为450mg·kg-1)联合米非司酮（剂量为3.75mg·kg-1）复制肾虚黄体不健流产模型。观察各组大鼠的子宫质量、胚胎数及流产情况，采用流式细胞仪检测外周血TCRγδT及CD3+T淋巴细胞

2、水平。【结果】模型组大鼠子宫质量、孕胎数显著性降低，流产率显著性升高（P＜0.01）；中药高、低剂量组均可显著性升高子宫质量及孕胎数，降低流产率（P＜0.05或P＜0.01),且呈现一定的量效关系，其作用与孕激素多力玛相似。模型组CD3+T细胞水平显著性升高，TCRγδT细胞/CD3+T细胞比值显著性降低，TCRγδT细胞水平有降低趋势，中药高剂量组可显著性升高TCRγδT细胞水平和TCRγδT细胞/CD3+T细胞比值，低剂量组可降低CD3+T细胞水平（均P＜0.05或P＜0.01)。【结论】助孕3号方的保胎作用可能与其纠正免疫失衡状态及降低流产率有关。【关键词】助孕3号方/药理学自

3、然流产/中药疗法自然流产/免疫学疾病模型动物大鼠自然流产(spontaneousabortion，SA)是妇产科常见病之一，SA以其反复发生的倾向威胁着妇女的健康和家庭的稳定。因此，如何有效地防治SA，降低SA的发生率，一直是世界医学界关注的热点之一。由γ，δ两条异源肽链构成的T淋巴细胞抗原识别受体(Tcellantigenspeciticreceptor，TCR)称为TCRγδT，是T细胞表面特异性识别外来抗原与主要组织相容性复合体（majorhistopatibilityplex，MHC）Ⅰ类抗原的受体。研究认为［1］TCRγδT细胞在识别胚胎抗原中起关键作用，并决定与胚胎

4、抗原反应的质量，从而影响妊娠结局。本研究拟以羟基脲复制肾虚黄体不健大鼠流产模型，观察助孕3号方对TCRγδT细胞的影响，以探讨该方的保胎机制，现报道如下。1材料与方法1.1动物雄性10～12周龄SPF级SD大鼠，雌性8～10周龄SPF级SD大鼠，体质量约200～250g。购自广州中医药大学实验动物中心，合格证号为NO.0009247。1.2药物、试剂与仪器羟基脲为北京红惠生物制药股份有限公司产品，批号：20013389；多力玛（5mg烯丙雌醇/片）为匈牙利吉瑞大药厂产品，批号：20020213；米非司酮为上海华联制药有限公司生产，批号：H10950347。助孕3号方由菟丝子、桑寄生、

5、续断、黄芪、党参、女贞子等组成，提取工艺流程（由珠江医院提取加工）为药材洗净，第1次加10倍量水浸泡30min，提取2h，滤过；第2次加8倍量水提取2h，滤过，合并2次滤液，真空浓缩，真空度为0.08～0.085mPa；浓缩至1.5倍药材体积时，高速离心，转速1500r/min；上清液浓缩至比重为1.18；喷雾干燥，参数为温度180℃，出风温度90℃，流量500mL/min；最后得膏8.5kg，得膏率为8.5/32.76=25.9%。大鼠每种药物的用量根据大鼠用药人鼠换算公式计算而得。溶血素、藻红蛋白（phycoerythrin，PE）抗γδTCR单克隆抗体、异硫氰酸荧光素(fluo

6、resceinisothiocyanate，FITC)抗CD3单克隆抗体均购自深圳晶美生物工程有限公司。ALTRA流式细胞仪为美国BECKMANCOULTER公司产品。1.3分组、造模［2］、给药及观察指标将SD大鼠雌雄合笼，每日晨阴道涂片，以发现大量精子者作为妊娠第1天。将雌性受孕大鼠随机分为5组，每组8只。除空白对照组外，其他组均于妊娠第1至第7天以羟基脲灌胃（450mg·kg-1·d-1），第7天时灌服米非司酮（3.75mg·kg-1），复制肾虚黄体不健流产模型。造模同时，助孕3号方高、低剂量组（中药高、低剂量组）分别以7.08、3.54g·kg-1·d-1的剂量灌胃给药，多力

7、玛组以1.5mg·kg－1·d－1的剂量灌胃给药，模型组与空白对照组灌服等容积生理盐水，均连续7d。灌服米非司酮24h后，以乙醚麻醉，眼眶后静脉丛取血，用乙二胺四乙酸二钠盐（EDTA）抗凝管取500μL新鲜全血，1h内采用流式细胞仪检测TCRγδT细胞水平。1.4TCRγδT水平检测EDTA抗凝的新鲜大鼠外周全血50μL，分别加入10μLFITC抗CD3单克隆抗体、PE抗γδTCR单克隆抗体，混匀，避光孵育20min；加入1倍流式细胞检测剂2mL混匀，室温