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时间:2018-11-17
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1、助孕3号方对肾虚黄体不健流产大鼠TCRγδT细胞的影响【摘要】观察补肾健脾中药助孕3号方对肾虚黄体不健流产大鼠T淋巴细胞抗原识别受体(TCRγδT)的影响。【方法】将SD大鼠40只随机分为5组,即空白对照组,模型组,助孕3号方高、低剂量组(中药高、低剂量组,剂量分别为7.08、3.54g·kg-1·d-1),多力玛组(剂量为1.5mg·kg-1·d-1);除空白对照组外,其他组均采用羟基脲(剂量为450mg·kg-1)联合米非司酮(剂量为3.75mg·kg-1)复制肾虚黄体不健流产模型。观察各组大鼠的子宫质量、胚胎数及流产情况,采用流式细胞仪检测外周血TCRγδT及CD3+T淋巴细胞
2、水平。【结果】模型组大鼠子宫质量、孕胎数显著性降低,流产率显著性升高(P<0.01);中药高、低剂量组均可显著性升高子宫质量及孕胎数,降低流产率(P<0.05或P<0.01),且呈现一定的量效关系,其作用与孕激素多力玛相似。模型组CD3+T细胞水平显著性升高,TCRγδT细胞/CD3+T细胞比值显著性降低,TCRγδT细胞水平有降低趋势,中药高剂量组可显著性升高TCRγδT细胞水平和TCRγδT细胞/CD3+T细胞比值,低剂量组可降低CD3+T细胞水平(均P<0.05或P<0.01)。【结论】助孕3号方的保胎作用可能与其纠正免疫失衡状态及降低流产率有关。【关键词】助孕3号方/药理学自
3、然流产/中药疗法自然流产/免疫学疾病模型动物大鼠自然流产(spontaneousabortion,SA)是妇产科常见病之一,SA以其反复发生的倾向威胁着妇女的健康和家庭的稳定。因此,如何有效地防治SA,降低SA的发生率,一直是世界医学界关注的热点之一。由γ,δ两条异源肽链构成的T淋巴细胞抗原识别受体(Tcellantigenspeciticreceptor,TCR)称为TCRγδT,是T细胞表面特异性识别外来抗原与主要组织相容性复合体(majorhistopatibilityplex,MHC)Ⅰ类抗原的受体。研究认为[1]TCRγδT细胞在识别胚胎抗原中起关键作用,并决定与胚胎
4、抗原反应的质量,从而影响妊娠结局。本研究拟以羟基脲复制肾虚黄体不健大鼠流产模型,观察助孕3号方对TCRγδT细胞的影响,以探讨该方的保胎机制,现报道如下。1材料与方法1.1动物雄性10~12周龄SPF级SD大鼠,雌性8~10周龄SPF级SD大鼠,体质量约200~250g。购自广州中医药大学实验动物中心,合格证号为NO.0009247。1.2药物、试剂与仪器羟基脲为北京红惠生物制药股份有限公司产品,批号:20013389;多力玛(5mg烯丙雌醇/片)为匈牙利吉瑞大药厂产品,批号:20020213;米非司酮为上海华联制药有限公司生产,批号:H10950347。助孕3号方由菟丝子、桑寄生、
5、续断、黄芪、党参、女贞子等组成,提取工艺流程(由珠江医院提取加工)为药材洗净,第1次加10倍量水浸泡30min,提取2h,滤过;第2次加8倍量水提取2h,滤过,合并2次滤液,真空浓缩,真空度为0.08~0.085mPa;浓缩至1.5倍药材体积时,高速离心,转速1500r/min;上清液浓缩至比重为1.18;喷雾干燥,参数为温度180℃,出风温度90℃,流量500mL/min;最后得膏8.5kg,得膏率为8.5/32.76=25.9%。大鼠每种药物的用量根据大鼠用药人鼠换算公式计算而得。溶血素、藻红蛋白(phycoerythrin,PE)抗γδTCR单克隆抗体、异硫氰酸荧光素(fluo
6、resceinisothiocyanate,FITC)抗CD3单克隆抗体均购自深圳晶美生物工程有限公司。ALTRA流式细胞仪为美国BECKMANCOULTER公司产品。1.3分组、造模[2]、给药及观察指标将SD大鼠雌雄合笼,每日晨阴道涂片,以发现大量精子者作为妊娠第1天。将雌性受孕大鼠随机分为5组,每组8只。除空白对照组外,其他组均于妊娠第1至第7天以羟基脲灌胃(450mg·kg-1·d-1),第7天时灌服米非司酮(3.75mg·kg-1),复制肾虚黄体不健流产模型。造模同时,助孕3号方高、低剂量组(中药高、低剂量组)分别以7.08、3.54g·kg-1·d-1的剂量灌胃给药,多力
7、玛组以1.5mg·kg-1·d-1的剂量灌胃给药,模型组与空白对照组灌服等容积生理盐水,均连续7d。灌服米非司酮24h后,以乙醚麻醉,眼眶后静脉丛取血,用乙二胺四乙酸二钠盐(EDTA)抗凝管取500μL新鲜全血,1h内采用流式细胞仪检测TCRγδT细胞水平。1.4TCRγδT水平检测EDTA抗凝的新鲜大鼠外周全血50μL,分别加入10μLFITC抗CD3单克隆抗体、PE抗γδTCR单克隆抗体,混匀,避光孵育20min;加入1倍流式细胞检测剂2mL混匀,室温
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