补肾助孕方对lpd大鼠卵巢中vegf蛋白表达影响

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1、补肾助孕方对LPD大鼠卵巢中VEGF蛋白表达影响【摘要】目的考察补肾助孕方对黄体功能不全性(LPD)不孕症大鼠卵巢组织中血管内皮生长因子（VEGF）蛋白表达的影响。方法采用Western-Blot检测补肾助孕方高、中、低剂量组与阳性药、空白对照、模型组大鼠卵巢组织中VEGF蛋白表达。结果补肾助孕方各剂量组、阳性药组、空白组与模型组比较,VEGF蛋白表达的条带明显加深。结论补肾助孕方增加LPD大鼠卵巢组织中VEGF蛋白表达，从而促进黄体毛细血管生成，确保黄体最佳发育，起到治疗黄体功能不全性不孕症的作用。�【关键词】补肾助孕方；黄体功能不全；米非司酮片；血管内皮生长因子补肾助孕方是全国名老中医妇科

2、专家夏桂成的临床验方，由赤芍、山药、菟丝子、白芍等八味中药组成。LPD系指排卵后卵泡形成的黄体，这一与生殖密切相关的暂时的内分泌器官发育和功能不全。其临床特点是不孕和反复早期流产，约有3．5%~10%的不孕症、35%的早期妊娠流产和4%~60%的习惯性流产是由LPD所引起的[1]。1材料1．1实验动物6清洁级SD雌性大鼠90只(未孕，体质量200~240g)和清洁级SD雄性大鼠45只(体质量250~280g)。由南京中医药大学实验动物中心提供，使用动物合格证：SYXK(苏)2005-0009。1．2药品与试剂补肾助孕方药购于南京中医药大学百草堂，采用传统水煎提取。米非司酮片(RU486)，上海

3、医药集团25mg/片，生产日期：060702。达芙通，苏威制药生产,10mg/片，批号：329301。考马斯亮蓝G250，北京鼎国生物技术有限责任公司，LotNo：DH077。BSA，南京布克生物技术有限公司分装，LotNo：0628S04。β-巯基乙醇，AMRESCO公司，LotNo：0892B25。PMSF,AMRESCO公司，LotNo：0754。预染蛋白Marker，北京鼎国生物技术有限责任公司，LotNo：B023-3。VEGF一抗，santacruz公司，goatpolyclonallgG，LotNo：I2606。β-actinMonoclonalAb，联科生物，LotNo：055

4、k4854250707。兔抗羊lgG-HRP，联科生物，LotNo：71942。羊抗鼠lgG-HRP，联科生物，LotNo：73750。1．3实验仪器核酸蛋白分析仪，美国BECKMAN公司，型号DU640。PH计，HANNA，型号HI221。�电泳仪，北京六一仪器厂，型号DYY-C。电泳槽，Bio-Rad。水平脱色摇床，南京大学南达生物技术开发公司，型号TY-80S。2方法与步骤62．1造模方法以米非司酮(RU486)建立LPD不孕症模型[2-3]。雌鼠妊娠第3天各组(除空白对照组)灌服米非司酮溶液造成LPD不孕症模型，每天0．01ml/g。2．2实验步骤随机将雌鼠分为6组、每组15只，即：补

5、肾助孕方低剂量组9．57g(含生药量)/kg、中剂量组19．13g(含生药量)/kg、高剂量组38．26g(含生药量)/kg,阳性药(达芙通)组2mg/kg，空白对照组和模型组给等体积生理盐水,每只雌鼠灌胃给药0．01ml/g于第4天起连续灌胃给药10d，第13天于20：30左右，将雌雄大鼠(2:1)比例合笼，次日于07：30左右雌鼠阴道涂片观察，以发现大量精子为妊娠第1天。于妊娠第3天各组雌鼠灌服米非司酮，期间各组雌鼠连续灌胃给药。于妊娠第5天大鼠处死，取0．1g卵巢组织，置于0．4ml蛋白裂解液(50mMTris,150mMNaCl,1%TritonX-100,2mMPMSF,pH8．0)

6、中匀浆，在冰上静置30min后，4℃离心取上清液。用考马斯亮蓝法测定样品中的蛋白含量。取50μg总蛋白上SDS蛋白电泳，采用10%分离胶，然后再经转移电泳将蛋白转移至PVDF膜上。再将PVDF进行相应的免疫反应、化学发光、显影，定影。3实验结果�6胶片扫描结果显示，模型组、阳性药组、空白组、补肾助孕方药物组(高、中、低三个剂量)卵巢组织中的内参β-actin蛋白条带粗细、深浅基本一致，蛋白表达量基本相同（图1）。而模型组与空白组比较，其卵巢中的VEGF蛋白表达明显减少，阳性药及补肾助孕方药物组与模型组比较，能显著促进大鼠卵巢中的VEGF蛋白表达。4讨论�近10年，在妇产科生殖内分泌领域中VEG

7、F受到了极大重视，己成为生殖医学研究的热点和前沿[4-5]。大量的研究表明，VEGF在雌性哺乳动物子宫和卵巢等性腺系统中有特异表达，并参与排卵、胚胎植入、胎盘发生等多种雌性生殖过程。VEGF被认为与女性卵巢功能有着密切的关系[6-7]。Hornung等[8]也作出了VEGF高峰是排卵或作床的标志的结论。排卵后面向颗粒细胞层有快速的新血管化发生，卵巢黄体形成和内分泌功能依赖于新生毛细血管的生长。VE