反相高效液相色谱法测定湿生扁蕾中木犀草素和1,7

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1、反相高效液相色谱法测定湿生扁蕾中木犀草素和1,7.freelm×250mm,5μm)；流动相为甲醇(A)-0.4%磷酸水溶液(B)梯度洗脱,0～15min,A∶B＝50∶50,15～60min,A∶B＝55∶45；检测波长260nm；流速1mL/min；柱温30℃。结果1,7-二羟基-3,8-二甲氧酮和木犀草素分别在0.084～0.84μg和0.184～1.84μg范围内线性关系良好,相关系数分别为0.9994和0.9997；平均回收率分别为96.82%和97.19%,RSD均小于3%。结论该方法简便准确,.freelinationofluteolinand1,7-dihyd

2、roxy-3,8-dimethoxyxanthoneinHerbalGentianopsispaludosa.MethodTheRP-HPLCm×4.6mm,5μm)lumethanol(A)-0.4%H3PO4(B)Gradientelutionin,A∶B＝50∶50,15～60min,A∶B＝55∶45.Detection.FloL/min.Temperatureofcolumnethoxyxanthoneandluteolinethoxyxanthoneandluteolinethodethoxyxanthone；luteolin；RP-HPLC湿生扁蕾Gentiano

3、psispaludosa(Mum.)Ma为龙胆科扁蕾属一年生草本植物。具有清热解毒、利湿消黄、健脾止泻等功能,用于肝炎、胆囊炎、热病发斑、目赤肿痛、消化不良、肠胃炎等1。由于受诸多因素的制约,致使目前藏药材使用不规范,缺乏理化控制标准,因此,加强藏药材质量标准基础性研究,是保证和提高藏药标准化、规范化,进一步开发藏药以及发展民族医药事业的重要课题。湿生扁蕾主要含有酮类、黄酮类、三萜类化合物2,酮类和黄酮类化合物具有抗氧化、抗菌、护肝等生物活性3-4,其中木犀草素是湿生扁蕾抗腹泻活性成分,而1,7-二羟基-3,8-二甲氧基酮是湿生扁蕾抗菌活性成分5-6,所以,选择这两种成分

4、进行含量测定,为湿生扁蕾药材的质量控制提供可行的方法。1仪器与试药AgilentHP1100高效液相色谱仪(美国安捷伦公司)；AE-240电子天平(瑞士布奇)；KQ-100超声波清洗器(昆山市超声技术有限公司)；R-200旋转蒸发仪(瑞士布奇)。木犀草素对照品(批号111520-200201)购自中国药品生物制品检定所；1,7-二羟基-3,8-二甲氧基酮对照品(自提,HPLC归一化法测定纯度达98%以上)；湿生扁蕾药材经甘肃农业大学陈垣教授鉴定为GentianopsispaludosaMa。甲醇为色谱纯,水为重蒸馏水,其它试剂均为分析纯。2方法与结果2.1色谱条件色谱柱为ZO

5、RBAXSB-C18(250mm×4.6mm,5μm)；流动相为甲醇(A)-0.4%磷酸水溶液(B)梯度洗脱,A∶B＝50∶50(0～15min),A∶B＝55∶45(15～60min)；检测波长260nm；流速为1.0mL/min；柱温30℃。理论塔板数均大于3000。色谱图见图1。2.2对照品溶液制备精密称取木犀草素对照品2.1mg、1,7-二羟基-3,8-二甲氧基酮对照品4.6mg,置10mL量瓶中,加甲醇至刻度,摇匀,精密吸取1mL,用甲醇定容至5mL量瓶中,作为对照品溶液。2.3供试品溶液制备精密称取湿生扁蕾药材粉末1g,用50mL丙酮回流提取4h,提取水浴蒸干,残

6、渣加甲醇溶解并定容至10mL,摇匀,用0.45μm微孔滤膜过滤,作为供试品溶液。2.4线性关系考察精密吸取混合对照品溶液2、4、8、10、12、16、18、20μL,进样测定,以对照品进样量(μg)为横坐标,峰面积积分值为纵坐标,绘制标准曲线。木犀草素和1,7-二羟基-3,8-二甲氧基酮的回归方程分别为：Y＝84.526X－49.163,r＝0.9994和Y＝112.431X－117.129,r＝0.9997。结果木犀草素和1,7-二羟基-3,8-二甲氧基酮分别在0.084～0.84μg和0.184～1.84μg范围内线性良好。2.5精密度试验精密吸取混合对照品溶液10μL

7、,按上述色谱条件,重复进样5次,结果木犀草素和1,7-二羟基-3,8-二甲氧基酮的RSD分别为1.63%和0.97%,表明仪器精密度良好。2.6稳定性试验精密吸取同一样品溶液,按上述色谱条件,分别于0、2、4、6、8、12h各进样10μL,木犀草素和1,7-二羟基-3,8-二甲氧基酮的RSD分别为2.71%和1.33%,表明样品溶液在12h内稳定。2.7重复性试验精密称取同一批湿生扁蕾药材1g,共5份,分别按“2.3”项下方法制备样品溶液,各取10μL进样测定,结果木犀草素和1,7-二羟