黄芪与当归对体外培养糖尿病骨髓干细胞增殖和血管内皮生长因子表达的影响

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1、·652·中国骨伤2011年8月第24卷第8期ChinaJOrthopTrauma，Aug．2011，Vo1．24，No．8·基础,r,dI-究·黄芪与当归对体外培养糖尿病骨髓干细胞增殖和血管内皮生长因子表达的影响沈斌，陈雷，周凯，金可可(1．温州第八人民医院骨科，浙江温州325000；2．温州医学院附属第一医院骨科；3．温州医学院病理生理学教研室)【摘要】目的：观察黄芪、"3-归及二者合用对体外培养大鼠骨髓干细胞增殖的影响，并探讨其可能机制。方法：自2009年7月至2010年2月，选择5只雄性200-220gSD大鼠高糖

2、高脂饲料喂养4周后，给予链脲佐菌素(STZ)按照30mg／kg腹腔内注射2次诱发2型糖尿病。1周后检测血糖≥16．7mmol／L为2型糖尿病造模成功。密度梯度法分离5只大鼠骨髓干细胞，分为空白对照组(A组)、黄芪组(B组)、'-3归组(C组)、黄芪3'-归组(D组)。空白对照组加入无血清DMEM100l，黄芪组、当归组、黄芪当归组分别加入等量的用无血清DMEM配制的黄芪煎液、"-3归煎液、黄芪"3-归合煎液，终浓度分别为黄芪1100mg／L，"3-归1100mg／L，黄芪3'-归组含黄芪1100mg／L、"3-归220mg

3、／L。各组细胞培养14d后，采用MI’I1法测定细胞增殖，ELISA法检测细胞培养上清液VEGF蛋白浓度，Western—Blot检测骨髓干细胞VEGF蛋白表达。结果：与空白对照组比较，黄芪组和黄芪当归组的骨髓干细胞增殖水平、上清液VEGF蛋白浓度、骨髓干细胞VEGF蛋白表达水平均明显增高(P<0．05或P<0．01)，且黄芪当归组的以上作用均较黄芪组明显增强(P<0．05或P<0．01)。结论：单用黄芪或其与当归合用均具有刺激体外培养骨髓干细胞增殖的作用，可能与其促进VEGF蛋白表达增加有关，但单用'3-归无上述作用。【

4、关键词】黄芪；当归；血管内皮细胞生长因子类；细胞增殖；骨髓DOI：10．3969／j．issn．1003—0034．2011．08．009EfectsofAstragalusandAngelicaonbonemarrowstemcellsproliferationandVEGFproteinexpressioninvitroSHENBin，CHENLei，ZHOUKai，删Ke一e．DepartmentofPathophysiology，WenzhouMedicalCollege，Wenzhou325000，Zhejian

5、g，ChinaABSTRACTObjective：ToobservetheefectsofAstragalusandAngelicaonbonema~owstemcells(BMSC)proliferationinvitroandinvestigateitspossiblemechanism．Methods：Five200to220gSDratswerefedwithahi【ghfatdietfor4weeksandgiven30mg／kgstreptozotocin(STZ)twicedeveloptypeⅡdiabet

6、esfromJuly2009toFebruary2010．Theratswithbloodglu·coseconcentrationsof16．7mmol／Lormorewereconsidereddiabetic．BoneMarr0wStemCells(BMSC)werecollectedandisolatedbydensitygradientcentrifugation．TheBMSCweredividedinto4groups，includingemptycontrolgroup，Astragalusgroup，An

7、gelicagroupandAstragalusplusAngelicagroup．DMEMof100V．1wasaddedinemptycontrolgroup．DMEMof100tzlcontainingAstragalus(1100mg／L)，Angelica(1100mg／L)andAstragalus(1100mg／L)combinewithAngelica(220mg／L)wereaddedinAstragalusgroup，AngelicagroupandAstragalusplusAngelicagroup

8、respectively．ThecellproliferationwasdetectedbyMTFmethod，andtheconcentrationofVEGFinthesupernatantwasdeterminedbyELISA．TheVEGFexpres—sionwasanalyzedbyWes