骨髓基质细胞联合细胞因子对脐血CD133+细胞体外扩增作用的研究

《骨髓基质细胞联合细胞因子对脐血CD133+细胞体外扩增作用的研究》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在学术论文-天天文库。

1、骨髓基质细胞联合细胞因子对脐血CD133+细胞体外扩增作用的研究作者：毛平　曾进龙　王彩霞　杜庆华【摘要】　　为了探讨胚胎骨髓基质细胞联合细胞因子对脐血单个核细胞中CD133+细胞的体外扩增作用，将新鲜脐血中分离出来的MNC接种于无血清培养体系中培养14天。实验分为4组：C组为空白对照组，不含基质细胞和细胞因子；S组为单用基质细胞组；F组为单用细胞因子组；SF组为联合使用基质细胞和细胞因子组。在第0，6，10及14天检测有核细胞总数、CD133+细胞数及集落形成单位数。结果表明：各时间点SF组有核细胞总数的扩增倍数均高于其它组；除了第

2、14天外，SF组在第6、10天时CD133+细胞数、CFU数的扩增倍数均高于其它组。结论：胚胎骨髓基质细胞对延缓造血细胞的分化具有重要的作用，基质细胞联合细胞因子可以有效的扩增脐血单个核细胞及其中的CD133+细胞，这是一种比较接近于临床移植要求的造血细胞体外扩增方法。【关键词】骨髓基质细胞；造血干细胞；细胞扩增；CD133+细胞；脐血；细胞因子InVitroExpansionofCordBloodCD133+CellsSupportedbyBoneMarrowStromalCellsandCytokinesAbstractTheai

3、mofthisstudywastoinvestigatetheeffectsofhumanfetalbonemarrowstromalcells(FBMSC)incombinationwithexogenouscytokinesonsupportinginvitroexpansionofCD133+cellsincordbloodmononuclearcells(MNC).MNCsseparatedfromcordblood(CB)wereculturedforupto1daysinaserumfreesystemwithFBMSC

4、orexogenouscytokinesorbothofthem.Onday0,6,10and14,totalnucleatedcells(TNC)werecounted；CD133+cellswerequantifiedbyFACS,andhematopoieticprogenitorcellswereassessedbysemisolidcultureassay.TheresultsshowedthatthenumberofTNCwasremarkablyincreasedinFBMSCandcytokinegroup,theex

5、pansionofCD133+cellsandCFUwereincreasedinFBMSCandcytokinegroupexceptthatonday14.ItisconcludedthatFBMSCplayanimportantroleindelayingthedifferentiationofhematopoieticcells.FBMSCincombinationwithexogenouscytokinescanpromotetheeffectiveexpansionofCBMNCandCD133+cells,thisexp

6、andingsystemmaymeettheneedsforclinicalapplicationofexpandedCD133+cells.Keywordsbonemarrowstromalcell;hematopoieticstemcell;cellexpansion;CD133+cell;cordblood;cytokineCD34是目前造血干细胞最常用的表面抗原标志。随着对HSC研究的深入，人们发现存在CD34抗原尚未表达的造血干细胞［1］，又发现部分AC133可能是比CD34更早表达的表面抗原［2，3］，在第七届人类白细胞分

7、化抗原大会上AC133正式命名为CD133，CD133+细胞比CD34+细胞具有更高的增殖和自我更新能力［4］。我们利用本实验室已经建立的人胚胎骨髓基质细胞联合细胞因子的造血细胞体外培养体系［5］，以脐血MNC为起始细胞，研究脐血CD133+细胞的体外扩增潜能。材料和方法主要试剂和仪器羟乙基淀粉液购自美国公司。人淋巴细胞分离液购自天津灏洋公司。2ml一次性塑料培养瓶购自美国BectonDickinson公司。DMEMLG培养液及胎牛血清购自Gibco公司。青霉素和链霉素购自HyClone公司。无血清培养液使用StemspanTMSF

8、EM，造血祖细胞半固体培养基使用MethocultTMGFH4434，圴购自加拿大StemCellTechnologies公司。干细胞因子、酪氨酸激酶3类配基、血小板生成素均购自英国PeproTech公司。CD133P