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时间:2018-11-19
《脐血与外周血nkt细胞的体外扩增及其表型比较》由会员上传分享,免费在线阅读,更多相关内容在工程资料-天天文库。
1、脐血与外周血NKT细胞的体外扩增及其表型比较作者:刘嬿,范华骅,阮鸣,高跞,聂晓绚,杨懿铭,陆华中,高峰【摘要】为了建立体外有效扩增脐血与外周血天然杀伤T细胞(NKT细胞)的方法并研究其表型的差异,分别采用单加IL-2及同时加IL-2和α-半乳糖神经酰胺(α-Galcer)的方法,从人脐血单个核细胞(UCB-MNC)和人外周血单个核细胞(PB-MNC)中扩增NKT细胞;用流式细胞检测技术测定NKT细胞(TCRVα24+TCRVβ11+)的比例及其它表型特征。结果显示:UCB-MNC在第7天时,其TCRVα
2、β+NKT细胞的扩增量占淋巴细胞的(24.48±419)%,是原来的(8.74±4.37)×102倍(P<0.01),而且大多不表达NK1.1(CD161);TCRVβ11+较TCRVα24+高表达;第14天时,PB-MNC中的TCRVαβ+NKT细胞扩增量占淋巴细胞的(11.1±3.61)%,是原来的(372±201)×102倍(P<0.01),且NK1.1高表达,TCRVβ11+与TCRVα24+表达率基本一致。结论:α-Galcer对NKT细胞有特异的扩增功能,且脐血NKT的扩增效
3、率较外周血高。以表型划分,脐血中的NKT细胞多为NK1.1-,而外周血多为NK1.1+,是一种新的NKT细胞亚型。【关键词】脐血 ProliferationofNaturalKillerTCellsinUmbilicalCordBloodandPeriperalBloodandTheirDifferentPhenotypes AbstractPurposeofthisstudyethodinvitrotoproliferatenaturalkillerT(NKT)cellsfromumbilical
4、cordblood(UCB)andperiperalblood(PB),andtostudythEirdifferentphenotype.Mononuclearcells(MNC)fromUCBandPBl),inedbyfloetry.TheresultsshoUCB-MNCsincreasedby(8.74±4.37)×102timesasmuch,butmostofthemdidnotexpressNK1.1anditsTCRVβ11+PB-MNCsincreasedby(3.72±2.01)×1
5、02times,theexpressionofNK1.1ostequaltoTCRVα24+.ItisconcludedthathumanTCRVα24Vβ11doublepositiveNKTcellscanexpandbyadditionofα-Galcer.TheproliferationefficiencyinUCB-MNCsisgreaterthanthatinPB-MNCs.MostoftheUCB-NKTisNK1.1-,bilicalcordblood;periperalblood;nat
6、uralkillerTcell;α-Galcer;phenotype新近研究发现,构成机体免疫系统的淋巴细胞中,除T、B、NK细胞外,还存在一种新的细胞系——NKT细胞。这种细胞有严格的CD1d限制性,且具有大量释放IL-4和IFN-γ的能力[1]。NKT细胞不仅其本身具有抗肿瘤、抗病毒和抑制自身免疫性疾病的功效,而且还能刺激T、NK等免疫细胞的活性,增强其细胞毒效应,抑制GVHD的发生。但是,NKT细胞在人体内的含量极少,仅占全血细胞的0.02%左右,很难用于临床研究和治疗。本研究通过对脐血与外周血中N
7、KT细胞的扩增,探讨一种高效的体外扩增NKT细胞的方法,并同时比较两种不同来源NKT细胞间的表型差异,现报告如下。 材料和方法 试剂与仪器 Ficoll-Paque细胞分离液(密度1.077g/ml,Phamarcia公司产品);12孔细胞培养板(Corning公司产品);RPMI1640培养基(Gibco公司产品);KRN7000 (αlpha-galactosylceramide,简称α-Galcer,日本麒麟公司惠赠,100ng/ml);IL-2(RD公司产品);PE标记的TCRVα24、C
8、D161及FITC标记的TCRVβ11单克隆抗体(Immunotech公司产品);6%羟乙基淀粉(HES)生理盐水溶液(B.Braun公司产品);EPICSELITEESP型流式细胞仪(Beckman-Coulter公司产品)。 方法 脐血单个核细胞(UCB-MNC)的制备新鲜采集的正常人脐血以ACD-B抗凝血袋收集,继以体积比4∶1加入6%HES液中,吹打均匀后4℃下静置1小时,吸取中间白膜层用0.6%ACD-PBS对倍
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