脐血与外周血nkt细胞的体外扩增及其表型比较

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1、脐血与外周血NKT细胞的体外扩增及其表型比较作者：刘嬿，范华骅，阮鸣，高跞，聂晓绚，杨懿铭，陆华中，高峰【摘要】为了建立体外有效扩增脐血与外周血天然杀伤T细胞（NKT细胞）的方法并研究其表型的差异，分别采用单加IL-2及同时加IL-2和α-半乳糖神经酰胺（α-Galcer）的方法，从人脐血单个核细胞（UCB-MNC）和人外周血单个核细胞（PB-MNC）中扩增NKT细胞；用流式细胞检测技术测定NKT细胞（TCRVα24+TCRVβ11+）的比例及其它表型特征。结果显示：UCB-MNC在第7天时，其TCRVα

2、β+NKT细胞的扩增量占淋巴细胞的（24.48±419）%，是原来的（8.74±4.37）×102倍（P<0.01），而且大多不表达NK1.1（CD161）；TCRVβ11+较TCRVα24+高表达；第14天时，PB-MNC中的TCRVαβ+NKT细胞扩增量占淋巴细胞的（11.1±3.61）%，是原来的（372±201）×102倍（P<0.01），且NK1.1高表达，TCRVβ11+与TCRVα24+表达率基本一致。结论：α-Galcer对NKT细胞有特异的扩增功能，且脐血NKT的扩增效

3、率较外周血高。以表型划分，脐血中的NKT细胞多为NK1.1-，而外周血多为NK1.1+，是一种新的NKT细胞亚型。【关键词】脐血　　ProliferationofNaturalKillerTCellsinUmbilicalCordBloodandPeriperalBloodandTheirDifferentPhenotypes　　　AbstractPurposeofthisstudyethodinvitrotoproliferatenaturalkillerT(NKT)cellsfromumbilical

4、cordblood(UCB)andperiperalblood(PB)，andtostudythEirdifferentphenotype.Mononuclearcells(MNC)fromUCBandPBl)，inedbyfloetry.TheresultsshoUCB-MNCsincreasedby（8.74±4.37）×102timesasmuch，butmostofthemdidnotexpressNK1.1anditsTCRVβ11+PB-MNCsincreasedby（3.72±2.01）×1

5、02times，theexpressionofNK1.1ostequaltoTCRVα24+.ItisconcludedthathumanTCRVα24Vβ11doublepositiveNKTcellscanexpandbyadditionofα-Galcer.TheproliferationefficiencyinUCB-MNCsisgreaterthanthatinPB-MNCs.MostoftheUCB-NKTisNK1.1-，bilicalcordblood；periperalblood；nat

6、uralkillerTcell；α-Galcer；phenotype新近研究发现，构成机体免疫系统的淋巴细胞中，除T、B、NK细胞外，还存在一种新的细胞系——NKT细胞。这种细胞有严格的CD1d限制性，且具有大量释放IL-4和IFN-γ的能力［1］。NKT细胞不仅其本身具有抗肿瘤、抗病毒和抑制自身免疫性疾病的功效，而且还能刺激T、NK等免疫细胞的活性，增强其细胞毒效应，抑制GVHD的发生。但是，NKT细胞在人体内的含量极少，仅占全血细胞的0.02%左右，很难用于临床研究和治疗。本研究通过对脐血与外周血中N

7、KT细胞的扩增，探讨一种高效的体外扩增NKT细胞的方法，并同时比较两种不同来源NKT细胞间的表型差异，现报告如下。　　材料和方法　　试剂与仪器　　Ficoll-Paque细胞分离液（密度1.077g/ml，Phamarcia公司产品）；12孔细胞培养板（Corning公司产品）；RPMI1640培养基(Gibco公司产品)；KRN7000　　(αlpha-galactosylceramide，简称α-Galcer，日本麒麟公司惠赠，100ng/ml)；IL-2(RD公司产品)；PE标记的TCRVα24、C

8、D161及FITC标记的TCRVβ11单克隆抗体(Immunotech公司产品)；6%羟乙基淀粉（HES）生理盐水溶液(B.Braun公司产品)；EPICSELITEESP型流式细胞仪(Beckman-Coulter公司产品)。　　方法　　脐血单个核细胞（UCB-MNC）的制备新鲜采集的正常人脐血以ACD-B抗凝血袋收集，继以体积比4∶1加入6%HES液中，吹打均匀后4℃下静置1小时，吸取中间白膜层用0.6%ACD-PBS对倍