以hpv l为载体的沙眼衣原体外膜蛋白多表位研究

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1、以HPVL2为载体的沙眼衣原体外膜蛋白多表位免疫保护研究可行性研究报告1．立项的背景和意义人乳头瘤病毒（humanpapillomavirus,HPV）和沙眼衣原体（Chlamydiatrachomatis,CT）均可通过黏膜感染。HPV高危型别HPV16、18型与宫颈癌的关系已被证实［1-2］，而低危型别HPV6、11型则主要引起生殖道尖锐湿疣。CT感染最终引起严重的输卵管瘢痕形成而致不孕,同时还可使宫颈癌的发病率增加［3-5］。据WHO统计,全世界每年有8900万例泌尿生殖道沙眼衣原体感染病例，低年龄尤其是小于20岁是CT感染的高危因素，应将该人群优先作为预防、控制疾病的目标人群，而寻求有

2、效的疫苗是防治其感染及其相关疾病的主要途径。传统疫苗有减毒活疫苗和灭活疫苗，随着分子生物学与分子免疫学的发展，20世纪90年代出现了核酸疫苗等。核酸疫苗主要为DNA疫苗，其原理是将核酸疫苗直接导入动物细胞内，通过宿主细胞的转录系统合成抗原蛋白，诱导宿主对该抗原蛋白产生持久甚至终身免疫应答，且同种异株间交叉保护作用好，产生的抗原多肽以天然的构象递呈给免疫识别系统，与自然感染相似，不存在减毒和灭活疫苗潜在的致病危险性，从而使被接种动物获得相应的免疫保护；不同的核酸疫苗具有共同的理化性质，为联合免疫提供了可能；核酸疫苗的安全、热稳定性、价廉等优点而受到高度重视，目前，美国FAD已批准乙肝疫苗等10余

3、种核酸疫苗进入临床试验，这更充分显示出核酸疫苗的巨大潜力和应用前景。表位疫苗（Epitopevaccine）则是上述疫苗的进一步发展，它是根据抗原表位氨基酸序列制备而成的疫苗［6］，与常规DNA疫苗相比具有更多的优势，其特点是具有安全性好、容易获得、特异性强，可以在同一载体中表达抗同一病原的多种抗原表位，诱导多重免疫保护性反应，或在同一载体中表达抗多种病原的抗原表位，避免了将多个抗原基因同时克隆到同一载体的困难，以及可能由此引起的转录干扰问题，使研制预防多种疾病的广谱疫苗成为可能。细胞毒T细胞（CTL）表位能诱导CTL细胞活化，其介导的CTL杀伤作用是宿主抗胞内寄生病原和抗肿瘤的主要途径。最近

4、研究表明携带CTL表位的DNA疫苗能诱发机体产生很强的针对该表位的特异性CTL反应，起到免疫保护作用。B细胞表位则是抗原表面能被B细胞识别，可诱导B细胞介导体液免疫、产生特异性中和抗体的抗原表位，存在生殖道粘膜局部的中和抗体在机体有效防止病毒经粘膜感染方面起重要作用。以特异性表位为基础进行疫苗分子设计并以抗原表位为靶抗原，既能诱导特异性的免疫应答，又避免了天然抗原中对机体产生不利影响的抗原成分，可使诱导的特异性免疫应答具更强的特异性和更高的免疫效应，因而表位疫苗已成为防治病原感染研究的一个新方向，但表位疫苗的免疫原性弱和B细胞表位的天然构象问题尚待解决。采用基因工程方法在真核表达系统中表达的H

5、PV结构蛋白L2，作为疫苗载体具有免疫原性强、安全无毒、接种方式多样化等优点；且在L2的羧基端加入异源蛋白并不影响L2和异源蛋白的免疫原性和空间构象［7-8］，可在理论上解决DNA疫苗研究中存在的问题，并为嵌合基因工程疫苗的研制奠定了基础。本研究以HPV16型L2作为疫苗载体，拟选择本实验室已经证实的具有较强免疫原性和免疫保护作用的CT-MOMP168多表位，构建HPVL2/CT-MOMP多表位重组真核质粒，并探讨其刺激机体产生的免疫效应；进一步利用小鼠检测HPVL2/CT-MOMP168多表位重组真核质粒的免疫效应，证明其具有刺激机体产生免疫效应，兼具防治CT的作用，就能为同时防治这两种病原

6、体的感染及其相关肿瘤的研究开辟一条全新的途径。本研究不仅能促进HPV、CT分子生物学和免疫机理等方面的研究，而且本研究技术的确立还为制备HPV-CT嵌合疫苗最终应用于临床提供理论和实验依据，并为进一步以HPVL2作为抗原释放系统研究其它病毒性疫苗奠定基础，因此本项目具极重要的应用价值。2.国内外研究现状和发展趋势2.1HPV结构蛋白L1和L2的研究HPV是一种双链DNA病毒,呈无包膜的20面体对称结构，其基因组按功能不同分为3个区：非编码区、早期区和晚期区。主要表达8种蛋白成分，即E1、E2、E4～E7、L1、L2。其中，主要衣壳蛋白L1和次要衣壳蛋白L2是HPV编码的晚期结构蛋白，二者共同构

7、成HPV的衣壳，其中L1占90%以上，L1或L2在真核细胞内可自我组装成空心病毒样颗粒(virus-likeParticles，VLPs)，与天然病毒颗粒具有相似的空间构象、免疫特性和生物学活性等［9］，是近年来血清学诊断抗原及HPV疫苗研究的重要靶抗原。研究发现，HPVL2的氨基端序列，在临床常见的HPV感染的各型别间具有高度的保守性，同时HPVL2也可协同L1通过真核表达系统自我组装形成VLP